应欧洲药品质量管理局（EDQM）邀请，我院药理室谭德讲副主任、贺庆研究员于2023年2月14日至16日线上参加由EDQM和欧洲动物实验替代方法合作组织（EPAA）共同组织举办的“热原检测的未来：逐步淘汰家兔热原检查法”会议。

一、会议背景

自《欧洲动物保护公约》通过以来，欧洲药典委员会开展了一项旨在应用3Rs（减少、优化和替代动物试验）原则的工作方案。2021年6月，欧洲药典委员会向完全取代家兔热原检查法（RPT）迈出了第一步，并计划在未来5年内，用合适的体外替代方法完全取代RPT。

本次会议是欧洲药典（EP）为实现上述目标而举办的里程碑性质的官方国际会议，会议在比利时布鲁塞尔举办，受邀参会人员主要来自EDQM、欧洲药监局（EMA）、世界卫生组织（WHO）、美国食药监局(FDA)、美国药典（USP）、德国联邦药品和医疗器械研究所（FIDMD）、德国联邦药品和保健品管理局（FAGG）、德国血清与疫苗研究所（PEI）、英国国家生物制品检定所（NIBSC）、意大利国家卫生研究所（ISS）、中国食品药品检定研究院（NIFDC）、日本国家健康科学研究所（NIHS）、巴西国家替代方法验证中心（BraCVAM）、印度药典委员会（IPC）和世界知名药企（如GSK、Janssen、Pfizer、Takeda、Sanofi）等机构的专家学者，旨在讨论并推动体外热原检测替代方法的进一步发展。

二、会议内容

本次会议主题包括①深入介绍EP逐步淘汰RPT的策略、②单核细胞活化试验（MAT）的使用、③监管机构和行业代表的观点、④欧洲以外地区对不使用动物进行热原检测的观点、⑤MAT的操作培训。

Dr. Emmanuelle Charton代表EDQM介绍EP热原检测技术发展历程：1971年EP收录RPT（EP 2.6.8），1987年收录鲎试剂细菌内毒素检查法（BET）（EP 2.6.14），2010年收录MAT（EP 2.6.30），2020年收录重组C因子细菌内毒素检查法（rFC BET）（EP 2.6.32）。同时介绍EP 淘汰RPT策略：EP将形成新的热原章节（EP 5.1.13），计划到2025年将删除60个文本中的RPT，到2026年删除EP 2.6.8。

Dr. Gwenaël Ciréfice代表EDQM介绍现版EP收录MAT（EP 2.6.30）的设计要点，以及基于实验人员操作经验的积累和反馈，将对MAT作出的修订（包括利用实验灵敏度代替LOD来计算MVD、取消对标准曲线平行性的要求）、MAT参考批次比较法在含固有热原成分疫苗中的应用。

Dr. Ruth Daniels代表Janssen从企业角度介绍其对MAT进行的内部开发和验证，其利用PBMC/IL-6法已经完成7个治疗性单抗产品的验证，使用MAT替代RPT的数据已获准3个MAA提交。同时面临缺少非内毒素国际标准品；方法中牛血清与人AB血清的替代使用；4参数拟合内毒素标准曲线的相关要求；各国对MAT认可度存在不确定性（如一些国家/地区可能不接受MAT数据，并要求RPT数据作为商业许可申请的一部分）；某些产品对MAT（如PBMC/IL-6法）存在较难排除的干扰作用，需要对MAT所采用检测指标和细胞做进一步的开发和优化等挑战。

Dr. Peter Turecek代表Takeda介绍生物制药和血浆行业对热原检测的观点。Takeda自1950s便开始控制和限制动物实验，2005年Takeda就认为BET和MAT均可替代RPT，2014-2017期间Takeda已利用BET替代RPT检测其所有血浆来源产品，2015-2018期间Takeda已将RPT稳步减少约35%，其正继续致力于在全球范围内彻底淘汰RPT；Takeda也正利用rFCBET替代传统鲎试剂BET；而针对罕见病的生物制品，因其年产量极少（如1-2批/年），导致MAT替代验证中所需的统计批次不足，MAT难以在此类品种热原检测中进行替代；未来Takeda将主要利用rFC BET和MAT控制其产品热原。

Dr. Ned Mozier代表Pfizer介绍低内毒素回收产品的热原检测比较研究，阐明MAT可解决低内毒素回收产品的热原检测问题。Dr. Liliana Alleri代表GSK介绍其利用MAT检测疫苗产品（如Bexsero、Encepru）热原的开发，强调应基于风险分析来选择MAT或BET替代RPT，计划到2025年其产品QC将完全取消RPT。Dr. Emmanuelle Coppens和Dr. Stéphanie Richard代表Sanofi介绍其疫苗产品未来热原检测将不再使用RPT，计划2020-2030期间将在全球范围内减少50%的动物使用，其对疫苗QC的战略规划是将不采用基于动物的分析实验，同时正开发利用PBMC/IL-6法检测疫苗热原。

Dr. Uwe Lipke代表FIDMD介绍MAT可能不适用于所有抗生素品种，应基于风险分析选择抗生素所适用的热原检测方法。Dr. Beken Sonja代表EMAs介绍EMAs在实践中的监管科学策略和基于3R测试方法的监管。Dr. Leslie Furr代表USP介绍USP热原检测发展概况，2012年美国FDA提及MAT可作为热原检测的替代方法；2017年USP

Dr. Richard Isbrucker代表WHO介绍WHO指南的热原检测建议，强调应基于风险分析选择产品的热原检测方法，如仅含内毒素污染，可采用rFC或LAL方法（rFC更好）；如存在非内毒素热原，则采用MAT；如果没有其他合适方法可用，可仅用RPT。

贺庆博士代表中检院介绍中国药典热原检测技术发展概况，2020版中国药典收录的热原检测方法包括RPT（通则1142）、鲎试剂BET（通则1143）/rFC BET（指导原则9251）、MAT（指导原则9301），基于风险控制，中国药典目前将MAT作为热原检查的补充方法；同时通过进一步改进MAT所用细胞和检测指标，已完成研究建立报告基因热原检测法的新进展,目前该方法的中国药典标准已完成公示；为体外热原检测方法在中国的推广应用打下良好基础。

Dr. Takao Ashikaga代表NIHS介绍日本药典（4.04热原检查）正在讨论收录MAT，目前仅有少数日本公司考虑采纳MAT。Dr. Octavio Augusto Franca Presgrave代表BraCVAM介绍巴西对MAT的监管许可进展，计划到2024年将MAT列为药典官方方法。Dr. Kalaivani Muthusamy代表IPC介绍印度药典热原检测概况，2018版IP已收录MAT（通则2.2.25）。

三、会议体会

1.替代RPT是热原检测领域的国际发展趋势

热原检测是保证各类非肠道用药安全性的一项关键共性技术，研究符合3R理论及切实可行的热原检测技术得到各国药品监管机构的高度重视。针对RPT的不足和新型生物技术产品发展的需求，研究建立体外热原检测替代方法（如MAT）替代RPT是热原检测领域的国际发展趋势。

2.我院一直在紧跟国际发展趋势，同时不断创新研究的新方法也受到关注

在各级领导和专家的支持指导下，我院一直紧跟国际趋势研究建立体外热原检测关键方法及其药典标准。目前我院已建立相应MAT[Innate Immunity, 2018, 24(5), 316–322]并将其纳入2020版《中国药典》（指导原则9301）；在此基础上，我们进一步针对MAT方法的缺点创新性开展报告基因热原检测法的研究，率先取得进展（Jpn. J.Infect. Dis., 2020, 73, 111–118），初步显示该方法的优势并得到国际同行的关注。

3.应重视加强国际交流，不断提升中检院的研究水平和国际影响力

应用3Rs（减少、优化和替代动物试验）是国际药品质量控制方法研究的趋势，我们应跟踪国际发展趋势，同时不断创新，积极参与国际相关领域的学术会议，既能学习交流，又是展示研究结果、争取协同发展的机会，不断提升中检院在药品标准领域的研究水平和国际影响力。

EDQM /EPAA “热原检测的未来：逐步淘汰家兔热原检查法”会议现场