目的 建立树鼩永生化脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs),明确 D-半 乳糖对 BMECs 衰老的影响,探索其潜在机制。

方法 用携带 SV40T 基因的慢病毒转染 BMECs,传至 50 代后进行 形态观察、生长曲线测定以及免疫荧光和核型鉴定;再用不同浓度 D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导 BMECs,通过 细胞增殖实验确定最适诱导条件,用衰老相关 β 半乳糖苷酶染色分析细胞衰老情况,Western Blot 检测衰老相关蛋 白 p53 的表达水平,超氧化物歧化酶和脂质氧化检测试剂盒检测细胞内氧化应激水平。

结果 永生化的细胞生长 状态较好,不同代次的细胞形态一致,单个细胞呈短梭形或多角形,整体呈典型的铺路石状;细胞生长曲线显示细 胞数量在第 2 ~ 5 天时处于对数生长期,在第 6 天时达到高峰,之后缓慢增长进入平台期;免疫荧光显示该细胞特 异蛋白 vWF 和 CD31 及永生化基因 SV40T 为阳性;细胞核型结果显示永生化细胞染色体数目与滇西亚种树鼩的染 色体数量相符;D-gal 诱导 BMECs 抑制细胞增殖,有时间和浓度依赖性;实验组,即浓度为 10 g / L 的 D-gal 诱导 48 h 的 BMECs,β-半乳糖苷酶染色阳性明显增多、衰老相关蛋白 p53 显著增多、细胞内 SOD 酶活性降低和 MDA 含量增 多。

结论 成功构建树鼩永生化脑微血管内皮细胞系,10 g / L 的 D-gal 是建立永生化 BMECs 衰老模型的适合浓 度,D-gal 在体外促进细胞衰老可能是通过促进氧化应激水平、抑制细胞增殖来实现的。

阅读原文：树鼩脑微血管内皮永生化细胞系的建立及最适D-半乳糖浓度诱导BMECs衰老细胞模型的探讨.pdf