目的 建立树鼩视网膜来源的微血管内皮细胞的体外分离培养技术以及永生化细胞株,为体外利 用树鼩视网膜微血管内皮细胞开展相关研究提供新的实验材料。

方法 利用Ⅱ型胶原酶、分散酶和 DNase Ⅰ酶消 化法分离培养出原代视网膜微血管内皮细胞,利用差速消化法纯化内皮细胞,然后利用携带 SV40T 基因的慢病毒 转染细胞,再挑取单克隆后进行传代培养。 对传至 50 代以上的细胞进行形态学观察、免疫荧光鉴定以及核型鉴 定。

结果 采用混合酶消化法能够分离获得微血管内皮细胞,纯化后的细胞呈不规则多角形和梭形。 经慢病毒转 染后的细胞传代培养后细胞形态一致,到第 50 代时细胞形态结构仍较好。 细胞免疫荧光结果显示标志性蛋白 VWF、CD34、Claudin1、ZO-1 和永生化 SV40T 表达阳性。 生长曲线结果显示:细胞生长旺盛,第 2 ~ 4 天时处于对数 生长期,第 4 天进入平台期。 细胞核型结果显示:染色体数与树鼩染色体相同,即所获取的细胞为永生化的树鼩视 网膜微血管内皮细胞。

结论 成功建立的树鼩视网膜微血管内皮细胞永生化细胞株具有较好的形态结构与功能, 为视网膜病变及眼科相关疾病的研究提供了新的实验材料。

阅读原文：树鼩视网膜微血管内皮细胞永生化细胞株的建立及鉴定.pdf