目的 建立造血系统特异性 Marcksl1 敲除小鼠,探究该基因敲除对小鼠成年造血的影响。

方法 对 E15. 5 Marcskl1 敲除小鼠进行胎肝竞争性移植实验,分析胎肝移植后不同月龄小鼠外周血中成熟功能谱系血细 胞的占比。 流式分选胎肝 KSL 细胞,利用 RNA-Seq 分析该基因敲除后差异基因表达。 利用 CRISPR/ Cas9 技术,构 建 Marcksl1 条件敲除小鼠,并与 Vav1-Cre 小鼠杂交,获得造血系统特异性 Marcksl1 敲除小鼠。 利用 PCR 和 Sanger 测序鉴定基因型。 利用 Real-time PCR 检测小鼠骨髓和造血干细胞中 Marcksl1 mRNA 的表达。 利用流式细胞技术 分析小鼠骨髓、外周血、脾和胸腺中不同类型造血细胞的占比。 通过竞争性骨髓移植实验分析 Marcksl1 敲除对造 血重建的影响。

结果 Marcksl1 敲除造成胎肝移植后 B 细胞占比下降、髓系细胞占比升高,骨髓中 CLP 和 CMP 占 比下降、GMP 占比升高。 RNA-seq 结果显示该基因敲除后导致胎肝 KSL 细胞中 252 个基因上调,400 个基因下调。 GO 结果显示差异基因主要富集在免疫应答、质膜以及低压门钙离子通道活性等相关基因。 KEGG 结果显示差异 基因主要富集在造血谱系分化和细胞因子受体互作相关信号通路。 我们利用 CRISPR/ Cas9 技术成功建立造血特 异性 Marcksl1 敲除小鼠。 流式结果表明 Marcksl1 缺失不影响小鼠成年造血,但影响骨髓移植后的造血重建能力。

结论 成功建立造血系统特异性 Marcksl1 敲除小鼠。 造血系统敲除 Marcksl1 基因,不影响成年稳态造血,但影响 成年造血重建能力。 我们建立的 Marcksl1 条件敲除小鼠,为该基因的成年造血功能研究以及该基因的其他组织特 异性功能研究提供了动物模型。

阅读原文：Marcksl1基因敲除对小鼠成年造血的影响.pdf