目的 探究 miR-34a-5p 通过靶向胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA 结合蛋白 3( IMP3)、程序性死亡配体 -1(PD-L1)表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响。

方法 利用 Human Protein Atlas 和 GEPIA 在线分析 TCGA 数据 库和 GTEx 项目中乳腺癌及正常组织 IMP3、PD-L1 的表达水平、患者的预后生存期;qRT-PCR、Western blot 检测 160 例患者乳腺癌组织及癌旁正常组织中 miR-34a-5p、IMP3 、PD-L1 mRNA 与蛋白表达;Pearson 检验分析 miR-34a-5p 分别与 IMP3 mRNA、PD-L1 mRNA 的相关性;免疫组化检测患者乳腺癌及正常组织 IMP3、PD-L1、白细胞分化抗原 44 变异体 6(CD44v6)的表达,分析 IMP3、PD-L1 表达水平与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶报 告实验验证 miR-34a-5p 对 IMP3、PD-L1 的靶向调控作用。 MCF7 细胞分为 control 组、miR-NC 组、miR-34a-5p 组、 miR-NC+pcDNA-NC 组、miR-NC+IMP3 组、miR-NC+PD-L1 组、miR-34a-5p +pcDNA-NC 组、miR-34a-5p +IMP3 组和 miR-34a-5p+PD-L1 组,采用 MTT 法、克隆形成、划痕、Transwell 小室实验测定细胞增殖活力、迁移、侵袭能力; Western blot 检测 IMP3、PD-L1、CD44v6、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。

结果 生物数据库显示乳腺癌组织 IMP3、PD-L1 表达水平越高,患者生存期越短(P<0. 05);qRT-PCR、Western blot 结果显示,乳腺癌组织 miR-34a-5p 表达水平明显低于正常组织,IMP3、PD-L1 mRNA 与蛋白表达水平明显高于正常 组织,miR-34a-5p 表达分别与 IMP3 mRNA、PD-L1 mRNA 呈明显负相关(P<0. 05);免疫组化结果显示,乳腺癌组织 IMP3、PD-L1、CD44v6 呈阳性表达,且 IMP3、PD-L1 表达越高,TNM 分期越晚,肿瘤分化程度越低、越容易发生淋巴 结和远处转移(P<0. 05);双荧光素酶实验验证了 miR-34a-5p 对 IMP3、PD-L1 的靶向调控作用;与 control 组和 miRNC 组相比,miR-34a-5p 组的细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMP3、PD-L1、CD44v6、MMP- 2、MMP-9 蛋白表达明显降低,E-cadherin 蛋白表达明显升高,与 miR-NC+pcDNA-NC 组相比,miR-NC+IMP3 组和 miR-NC+PD-L1 组细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMP3、PD-L1、CD44v6、MMP-2、MMP-9 蛋 白表达明显升高,E-cadherin 蛋白表达明显降低,与 miR-34a-5p+pcDNA-NC 组相比,miR-34a-5p+IMP3 组和 miR- 34a-5p+PD-L1 组细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMP3、PD-L1、CD44v6、MMP-2、MMP-9 水 平升高,E-cadherin 水平降低(P<0. 05)。

结论 miR-34a-5p 能够通过靶向调控 IMP3、PD-L1 表达抑制乳腺癌细胞 的增殖、迁移、侵袭和上皮间质化(EMT)。

阅读原文：miR-34a-5p通过靶向IMP3、PD-L1对乳腺癌细胞生物学行为的影响.pdf