目的 观察苗药地锦草对糖尿病肾病( diabetic kidney disease,DKD) 大鼠肾小球足细胞相关蛋白 Nephrin、Desmin 和 Angptl4 表达的影响,明确其在 DKD 治疗中的作用机制。

方法 30 只 8 周龄雄性 SD 大鼠随机 分为:正常对照组(Normal,N 组),DKD 组(D 组),DKD 地锦草治疗组(Euphorbia humifusa,E 组)。 D 组与 E 组大鼠 单次尾静脉注射链脲佐菌素(Streptozobocin,STZ)(55 mg / kg)复制 DKD 模型,N 组注射溶媒柠檬酸缓冲液,连续 3 次 24 h 尿白蛋白量>5 mg / d 可确定为糖尿病肾病成模,5 周后 D 组 10 只大鼠及 E 组 9 只大鼠 DKD 成模。 DKD 模 型复制成功后,E 组大鼠灌胃法服用地锦草 300 mg / (kg·d),D 组与 N 组灌胃给予同体积普通双蒸水,各组大鼠灌 胃共 16 周。 所有大鼠在处死前称重、每周收集大鼠留尿检测 24 h 尿白蛋白、留血检测血清白蛋白、尿素氮、肌酐、 胆固醇、白蛋白;苏木素-伊红(HE)染色、马松三色染色(Masson)观察肾病理学结构;透射电镜观察足细胞的形态; WT1 染色定位足细胞并采用 disector/ fractionator 方法行足细胞计数;免疫组化观察 Nephrin、Desmin、Angptl4 的蛋白 定位;Western blot 法检测 Nephrin、Desmin、Angptl4、Collagen IV 的蛋白表达量; qPCR 法检测 Nephrin、Desmin、 Angptl4、Collagen IV 的 mRNA 含量。

结果 D 组较 N 组大鼠血糖、24 h 尿白蛋白、尿素、肌酐、胆固醇均明显升高, 白蛋白明显降低(P<0. 05)。 E 组大鼠上述各指标均较 D 组明显改善(P<0. 05)。 HE 及 Masson 染色可见,N 组大 鼠肾小球结构完成,系膜细胞及基质正常。 D 组大鼠肾小球系膜细胞增生,系膜区基质沉积较多。 E 组大鼠经地锦 草灌胃治疗后上述情况得以改善。 透射电镜显示 N 组大鼠肾小球足细胞足突正常,D 组大鼠足突融合或消失,E 组大鼠足突较完整。 WT1 染色显示 D 组足细胞计数较 N 组减少,E 组较 D 组明显增加(P< 0. 05)。 免疫组化, Western blot 及 qPCR 结果显示,Desmin、Angptl4 及 Collagen IV 蛋白及 mRNA 在 N 组表达较少,上述指标在 D 组表 达明显增多(P<0. 05),E 组大鼠经地锦草治疗后 Desmin、Angptl4 及 Collagen IV 蛋白及 mRNA 的表达较 D 组明显 减少(P<0. 05)。 D 组 Nephrin 蛋白及 mRNA 表达较 N 组明显减少,E 组较 D 组表达增多(P<0. 05)。

结论 地锦 草治疗可以明显减少 DKD 大鼠足细胞 Desmin、Angptl4 及 Collagen IV 的表达并增加 Nephrin 的表达,有效保护足细 胞的机械屏障及电荷屏障,抑制足细胞发生转分化,减轻 DKD 大鼠的蛋白尿并改善其肾功能。

阅读原文：苗药地锦草对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞相关蛋白表达的影响.pdf