目的 建立一种快速灵敏的金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus） 检测方法。

方法 选择金黄色葡萄 球菌特异性基因nuc作为靶基因，设计并合成一对特异性引物和一条TaqMan探针，利用荧光定量PCR技术建立 nuc基因的核酸检测方法，并在大鼠、小鼠粪便样本检测中进行应用。

结果 对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡 萄球菌菌株中提取的DNA进行荧光定量PCR检测，结果显示金黄色葡萄球菌出现特异性扩增曲线，而其他非金黄 色葡萄球菌未出现，表明设计的引物和探针对金黄色葡萄球菌检测具有特异性。将提取的金黄色葡萄球菌DNA进 行10倍梯度稀释后测定其灵敏度，结果显示最低检出限是10 fg的DNA量，比普通PCR方法高2个数量级。本研究 共检测91份样品，有4份来自同一设施的大鼠样品，扩增曲线为典型的S曲线；将该PCR产物测序并进行BLAST 比对，该样本的基因序列与金黄色葡萄球菌的基因序列相似度为100%，表明该样本为金黄色葡萄球菌nuc基因核 酸阳性，阳性率为4.40%，与细菌培养法的检测结果一致。核酸提取采用全自动核酸纯化仪，从核酸提取到检测结 果判定快速，所需时间小于1.5 h。

结论 建立的以nuc为靶基因鉴定金黄色葡萄球菌的qPCR方法，具有快速、灵 敏度高和特异性强的优点，可用于实验动物大鼠、小鼠粪便中金黄色葡萄球菌的检测。

阅读原文：金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立及其在大鼠、小鼠粪便检测中的应用.pdf