目的 旨在建立一种高效的方法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）的方法，并应用 ＰＫＨ２６ 进行体外标记，探讨 ＰＫＨ２６ 标记对 ＢＭＳＣｓ 生物学特性的影响，以及体外示踪 情况。

方法 将大鼠 ５ ｄ 乳鼠双后肢骨进行分离，去除周围的肌肉和筋膜，并将其剪成小块进行培养，利用换液、传 代提纯 ＢＭＳＣｓ，应用流式细胞仪测定第 ３ 代细胞表面抗原。 在培养条件相同的情况下，取第 ３ 代 ＢＭＳＣｓ 应用 ＰＫＨ２６ 进行标记，标记组与未标记组在荧光显微镜下对细胞形态学、增殖状态进行观察，比较标记组与未标记组成 骨成脂诱导特点及鉴定。

结果 骨髓骨片法分离乳鼠双后肢骨，培养 ＢＭＳＣｓ 呈细长梭形，形态均一，短时间内可迅 速获得大量 ＢＭＳＣｓ；经流式细胞仪鉴定结果表明，表达 ＣＤ２９ 为（９１ １８±１ ２９）％，表达 ＣＤ９０ 为（９５ ０４±０ １１）％，表 达 ＣＤ４５ 为（１ ７４±０ ３６）％；ＰＨＫ２６ 标记对 ＢＭＳＣｓ 细胞形态，增殖无明显影响（Ｐ＞０ ０５），对成骨成脂诱导无影响。

结论 采用大鼠 ５ ｄ 乳鼠骨髓骨片法能够快速培养出大量高纯度的 ＢＭＳＣｓ，该细胞可作为种子细胞用于骨组织工 程；ＰＫＨ２６ 可对体外大鼠 ＢＭＳＣｓ 进行标记。

阅读原文：骨髓骨片法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞和ＰＫＨ２６标记.pdf