目的 探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌 EC9706 细胞能量代谢影响的分子机制。

方法 噻唑蓝(MTT)法检测 EAELD 对 EC9706 增殖活性的影响;比色法 检测 EAELD 对 CAFs 条件培养基(CAFM)下 EC9706 细胞上清中乳酸及葡萄糖含量的影响;Seahorse 能量代谢分析 系统检测 EAELD 对 CAFM 下 EC9706 细胞能量代谢的影响;实时荧光定量 PCR( RT-qPCR)、蛋白免疫印迹 (Western blot)法检测 EAELD 对能量代谢相关分子 mRNA 及蛋白表达的影响。

结果 与 DMEM 相比,除 10 μg / mL 组外,EAELD 对 EC9706 细胞增殖活性均有明显抑制作用(P<0. 05),选取抑制浓度( IC30 ) 25 μg / mL,半抑制浓度 (IC50 )40 μg / mL,作为低、高剂量组进行后续实验。 在 CAFM 培养的 EC9706 细胞各组中,EAELD 低、高剂量组都能显 著降低非线粒体耗氧、基础呼吸值、最大呼吸值、合成 ATP 耗氧量、备用呼吸能力、基础糖酵解、补偿糖酵解、糖酵解潜 能(P<0. 01),减少 EC9706 细胞上清乳酸含量(P< 0. 01),下调 GLUT1 的 mRNA 表达(P< 0. 05,P< 0. 01),下调 p-PKM2、HK2、PKM2、MCT1 蛋白表达(P<0. 01);EAELD 高剂量组能够下调 EC9706 细胞的线粒体耗氧与基础糖酵解 比值(P<0. 05),减少 EC9706 细胞葡萄糖摄取(P<0. 05),下调 p-PKM2、GLUT1 的蛋白表达(P<0. 01,P<0. 05);EAELD 低剂量组能够下调 MCT1 的 mRNA 表达(P<0. 05)。

结论 六君子汤乙酸乙酯提取物能够干预 CAFs 条件培养基下 EC9706 细胞的能量代谢,其机制可能与 EAELD 调控 HK2、PKM2、GLUT1、MCT1、MCT4 的 mRNA 和蛋白表达相关。

阅读原文：六君子汤乙酸乙酯提取物干预CAFs条件培养基下EC9706细胞能量代谢的机制研究.pdf