目的 建立并验证小鼠组织中人源 SRY 基因 DNA RT-qPCR 分析方法学,研究人脐带间充质干细 胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)单次静脉注射后在重度免疫缺陷 NOG 小鼠体内的组织 分布情况。

方法 建立小鼠组织中人源 SRY 基因 DNA 的 RT-qPCR 分析方法,进行标准曲线与线性范围、准确度 与精密度、稳定性等方法学验证。 取 NOG 小鼠 36 只,雌雄各半,单次静脉注射给予 HUCMSCs 3. 5 × 10 7 cells/ kg, 于 6、12、24、72 h、1 周、2 周各取 6 只小鼠麻醉,采集血液(EDTA 抗凝)后解剖,取肺、肾、心脏、肝、大脑、脊髓、胃、小 肠、脂肪、皮肤、脾、睾丸(子宫、卵巢)提取 DNA,用已验证的小鼠组织中人源 SRY 基因 DNA RT-qPCR 分析方法测 定各组织中 HUCMSCs 的分布情况。 另选取 NOG 小鼠 18 只,雌雄各半,分为对照组 6 只、给药组 12 只,分别静脉注 射 0. 9%氯化钠注射液、HUCMSCs 3. 5 × 10 7 cells/ kg,给药期间观察小鼠急性毒性反应情况,给药组于给药后 72 h、 2、4 周各取 4 只动物剖检观察脏器组织大体观情况,取肺组织石蜡切片采用免疫组化法检测线粒体蛋白表达,分析 HUCMSCs 在肺组织中的定植情况。

结果 建立的小鼠组织中人源 SRY 基因 DNA 的 RT-qPCR 分析方法各考察指 标均符合验证标准;NOG 小鼠单次静脉注射 HUCMSCs 后,主要分布于肺和血液中(给药后 1 周内),肺组织浓度高 于血液,肺组织、血液中 HUCMSCs 浓度分别在 6 ~ 24 h、6 ~ 72 h 之内维持相对平稳水平,之后随时间推移下降,其 他组织各采样点均未测得 HUCMSCs 分布;定植结果显示静脉注射 HUCMSCs 后 72 h 可在肺部检测到其存在,2 周 和 4 周时则未检测到;单次静脉注射 HUCMSCs 后 NOG 小鼠未见明显急性毒性反应。

结论 建立的 HUCMSCs 小 鼠组织中分布分析方法可靠、可行;NOG 小鼠单次静脉注射 HUCMSCs 后主要于给药后 1 周内分布于肺和血液,72 h 主要定植于肺组织;单次静脉注射 HUCMSCs 具有良好的安全性。

阅读原文：人脐带间充质干细胞单次静脉注射NOG小鼠组织分布及其分析方法学研究.pdf