实验方法
平阳霉素碘油乳剂致肝纤维化模型
1.造模材料 动物:4~5月龄日本大耳白兔,雌雄不限,体重(2.5±0.2)kg;药物:平阳霉素碘油乳剂。
2.造模方法 所有实验兔均于术前24h禁食,4h禁水。速眠新注射液0.8ml肌内注射麻醉,腹中线切口8cm长,进腹腔后,剪断小网膜(在兔身上实际为少量透明系膜组织),于胃幽门上方找到肝门,可见明显的肝动脉搏动,走行朝向肝内,中途可见其发出胃十二指肠动脉,向幽门部走行,用5号半头皮针穿刺肝动脉成功后针头越过胃十二指肠动脉注药。其中假手术组注入0.4ml生理盐水;模型组注入0.2ml碘油+2.0mg平阳霉素+0.2ml生理盐水制成的混悬乳剂;注药后拔出针头用明胶海绵按压1min,确定无出血后关腹缝合。
3.造模原理 平阳霉素碘油乳剂(PLE)对血管内皮细胞存在非特异性抑制和破坏作用,这种作用被称之为“祛血管作用”。PLE进入肝脏后,由于碘油在正常肝组织中能停留近20天,使得平阳霉素得以缓慢释放,造成慢性肝损伤。
4.造模后变化 造模1周后,模型组肝脏表面外被白色被膜,肝缘欠锐利;2周后肝缘进一步变钝;4周时大体观与2周相仿;6周时肝脏边缘进一步变钝,肝表面凸凹不平;10周时肝脏表面可见一直径约1cm的硬化结节,质硬,切割质地如胶皮感;14周时大体观与10周相仿。假手术组兔肝缘锐利,表面光滑,色泽鲜亮。
造模1周后HE染色可见肝细胞水样变性,肿胀,肝索拥挤,肝窦充血,门管区大量淋巴细胞浸润;2周时HE染色肝细胞明显水样变性,胞质空亮,部分肝细胞可见嗜酸性改变,肝窦充血,汇管区大量淋巴细胞浸润:4周HE染色肝细胞仍有明显水样变,汇管区大量淋巴细胞浸润,纤维组织增生明显,小叶间隔增厚,肝窦充血;6周HE染色肝细胞水样变性较前减轻,汇管区纤维组织大量增生,向小叶内延伸扩展,形成分割包绕趋势,部分肝组织可见增生的纤维结缔组织重新分割包绕形成假小叶。10周光镜下肝组织呈广泛纤维化改变,部分区域的肝组织可见大片团状增生的纤维结缔组织,无明显肝细胞结构;14周时光镜下改变与10周相仿。假手术组肝细胞形态正常,肝索排列整齐,小叶结构清晰。
5.注意事项 术中严格采用无菌操作,以防感染。