实验方法
动物实验操作中的生物安全问题
(1)隔离检疫:为了确保新引进的实验动物不带病原,首先必须要经过隔离检疫。检疫就是应用各种动物传染病的诊断方法,对实验动物及其产品进行疫病检查。检疫项目根据相关实验动物微生物检查要求进行。新进动物检疫时间在啮齿类动物一般施行2周隔离,犬猫为3周,兔类为2周,灵长类动物应为3周。具体检疫时间应遵照我国动植物检验检疫法的规定执行。新引进的啮齿类动物,应有供应商提供的实验动物质量合格证书,最新健康检测报告,检查运输的包装、注意运输途中是否被病原污染。兔、犬和猫等动物也要有供应商提供的健康报告,并应注射过常见传染病疫苗。灵长类动物检疫要特别注意。
(2)饲养
1)饮水卫生:不同级别的实验动物,其饮水的卫生标准是不一样的。对普通级来说,符合卫生标准的城市居民饮用水即可供其直接饮用。对于清洁级及其以上级别的实验动物来说,其饮用水必须经过高温高压灭菌处理,也可应用酸化水。给水设备必须按各级别实验动物的管理要求定期清洗消毒。饮水应每天更换,不要将饮水瓶由一个鼠盒随意移到另一个鼠盒上。
2)垫料卫生:垫料是实验动物最直接的生活环境,必须按照各种动物对垫料的要求提供。使用前要除尘灭菌。经常更换垫料以保持动物的清洁、干爽。更换的频度视动物的大小、密度、粪尿排出量和垫料的脏污程度,一般每周更换2次,如发现垫料浸水或有死鼠,必须及时更换垫料。清理垫料应在污物走廊或处理间进行,清理处理出来的垫料必须及时焚烧处理。
3)消毒灭菌:应制订严格的清洁卫生制度,有专人负责,定期检查,搞好场内外清洁卫生管理。动物笼架、笼盒、饮水瓶、料斗和饲槽等设备使用前要消毒,定期更换清洗。常用的灭菌方法包括:热灭菌法、冷灭菌法和60Co辐照灭菌法。消毒方法包括:化学药液浸泡法,清洗、熏蒸消毒法和热消毒法。饲料、物料、水、空气、房舍和设施等都要定期灭菌。
4)防虫、防野鼠:屏障环境实验动物房,在设计时应考虑到动物房的昆虫和野鼠的控制,并备有防虫防鼠的设备。开放的动物房要定期在其地板的四边、墙角等处喷杀虫剂、灭鼠剂,搞好环境卫生。
(3)给药:动物的给药方法很多,常用的有经口给药、皮下注射、皮内注射、腹腔注射、肌内注射和静脉注射等。给药前要固定好动物,给药过程中所有操作要严格按照操作规程进行。特别注意在感染性病原实验中的生物污染问题。
(4)注射器和针头的使用:在动物实验中,注射器和针头是危险性最大的用具。文献中记载的意外自身接种,导致了大量由各种感染性病原引起的职业性疾病。此外,从动物皮肤上或瓶塞上拔出针头时的振荡作用,可产生气溶胶。注射时须将动物绑定或镇静,以免误刺或振荡。针头不得弯折、截短。用于感染性实验的针头不要再放回针头套内,应在使用后从注射器上卸下,与注射器一并放入防穿刺的容器进行消除污染处理或高压灭菌后弃去。在使用移液管吸移液体时,唯一安全的方式是采用机械移液装置。在涉及感染性病原和动物性材料的工作区,要禁止口吸移液的危险性操作。
(5)麻醉:麻醉是动物实验中一项常用的措施,其方法有吸入麻醉法、注射麻醉法、口服及灌胃法和针刺麻醉法等。对动物麻醉时,要掌握最常用的吸入麻醉法和注射麻醉法以及不同种类动物、不同麻醉药品的使用方法和使用剂量。进行抓取及固定动物等操作时,要注意生物安全问题。避免环境污染及感染动物。
(6)安乐死:在实验动物繁殖生产和研究实验中,必须杀死的实验动物应采用安乐死术,以减少动物不必要的痛苦。在动物安乐死过程中,要注意不要被动物咬伤、抓伤,并尽可能减少动物的痛苦。
(7)尸体处理:动物尸体是实验动物设施产生的主要废弃物之一。动物实验室中必须设置容量充足的冷藏设备以暂时储存尸体。无害性动物尸体,是指未投药、未感染病原微生物或放射性物质的动物尸体,可以直接按生物垃圾处理。感染性的动物尸体应该用装载生物危害物质的塑胶袋妥善包装,经蒸气高温高压灭菌后,再以一般处理无害性动物尸体方法如置入冷冻库保存。尸体由冷冻库取出后需先解冻再予焚烧以避免燃烧不完全及浪费燃料。
放射性动物尸体,应以装载放射性物质的塑胶袋妥善包装,利用专用烘箱,以60~70℃将尸体水分烘干,为避免烘干过程中产生恶臭,可利用微波炉加热使水分分离。经干燥后的动物尸体可按废弃放射性材料处理方法处理。尸体解剖室须设置负压式解剖台。排气也需要经过过滤处理去除微生物和化合物。各种有机物及废液以适当容器回收。
(8)微生物病原:接种人类病原微生物的动物实验,使实验动物感染致病或对实验结果产生严重干扰的微生物实验,如SARS、禽流感等具有风险性的动物实验,其动物饲养房都应是负压、封闭式的,以防止污染物质直接散播到外界。这些被隔离的动物房舍所排放的空气必须经高效能空气过滤装置过滤后方可排放。
为防止动物因离开动物设施送往实验室的途中暴露,应使用设有滤网的运送箱或有空气过滤帽的笼盒,同时使用专用电梯或走廊。要确实遵守标准操作程序,避免人为因素造成病原微生物外流。要尽量避免将动物带离动物实验室,应设置动物处理室。使研究人员在动物房有工作空间,减少动物往返运送的机会。
(9)污水处理:在动物设施中产生的污水,如果符合排放标准,可排入一般废水处理系统,不会造成环保问题。感染性动物实验室所产生的废水,或许会含有致病微生物,威胁人体健康及环境卫生,此类废水需经化学处理消毒或加热高压蒸汽灭菌处理后方能排放。
(10)废弃物处理:废弃物包括使用过的垫料、动物排泄物、动物尸体、纸张及其他物品。设置负压式废弃垫料收集装置,避免垫料在清理过程中随空气散播。工作人员应穿戴防护装备。不同污染程度的废气垫料,应以不同方式处理。废弃物应定期清理,不做长期储存,动物房也应设有足够的贮存空间,以放置暂时无法立刻处理的废弃物。废弃物的处理时间应避开动物设施繁忙时间。在清理时要注意避免气溶胶形成,工作人员配备防护措施。放射性废弃垫料要以印有黄色放射性物质标志的塑胶袋包装,贮存于特定容器,待满后由专门人员集中处理。