实验方法
动物实验常用麻醉方法
麻醉方法是指麻醉剂的给药方法,视麻醉药物特性和麻醉目的而不同,如应用挥发性麻醉药物进行全身麻醉时使用吸入麻醉或者气管内插管法,应用非挥发性药物进行全身或者局部麻醉时使用注射麻醉、喷雾麻醉、涂布麻醉等。
(一)吸入麻醉
是让动物自主吸入麻醉蒸气或气体以达到全身麻醉目的,应用于挥发性麻醉剂,常用麻醉箱(anesthetic chambers)来实现,适合于对较难固定的小动物进行麻醉诱导。最简易的麻醉箱可以是一个诸如玻璃烧杯的器皿,容器中放置浸泡了挥发性液态麻醉药物的棉花或者纱布,待药物挥发麻醉蒸气充满容器,将动物投入容器内即可(图3-1-49)。此种方式虽简便,但动物可能直接接触麻醉剂而引起不适,即便采用铁丝网等将动物和浸润了麻醉剂的棉球隔开,由于麻醉蒸气浓度难以控制,常发生麻醉过浅或者过深,并且也很难避免麻醉蒸气对环境的污染和对操作人员的危害。通过麻醉机向麻醉箱内提供一定浓度的麻醉药蒸气即可解决上述问题。采用适当的麻醉回路(anesthetic circuits)能够保证动物安全地吸入麻醉蒸气以及废气的安全排放。
采用此种方式完成诱导后,需将动物提出麻醉箱进行实验,在实验过程中为了维持动物的麻醉状态,就需采用麻醉面罩给动物继续吸入麻醉蒸气。可以用小烧杯内置一块浸有麻醉剂的棉球,放在动物口鼻处代替麻醉面罩(图3-1-50),当药物即将挥发尽,动物开始苏醒时再加入麻醉剂,或将麻醉机接到麻醉面罩上使用。
(二)气管内插管麻醉
气管内插管麻醉是通过在气管内插管建立人工气道,输入麻醉气体达到全身麻醉的目的,适用于挥发性麻醉剂。气管插管前应了解动物咽喉部的结构,特别是软腭和会厌的解剖关系,选择合适的气管导管(管径、长度)以及喉镜,动物应进行麻醉诱导至消除咳嗽和吞咽反射,必要时应至浅麻醉状态。
1.啮齿类的气管内插管 大鼠和豚鼠的气管内插管常需要使用特制的喉镜或耳镜帮助观察喉部的状况,使大鼠或豚鼠侧卧,将舌头从一侧口角拉出,通过喉镜或耳镜观察其喉部并插入导管;小鼠、地鼠由于个体小,插管较困难。
2.兔的气管内插管 兔的喉部很难看见,如需直视喉部插管,应准备适当的喉镜或耳镜,但可以采用另一种方法而无需直视喉部,即使兔侧卧,抓紧并伸展头部,将头部上提至前肢刚好触及台面,此时可将导管从舌面上轻柔推进至喉部,并从导管的后端辨听呼吸音,如呼吸音强或者导管(聚乙烯材质)内壁有呼出气体的冷凝雾,提示导管接近喉部,此时在兔呼气时将导管轻柔推进即可,否则应退出导管重新进行,该方法适用于体重大于3kg的兔,但不能向声带喷洒局部麻醉剂防止喉痉挛。
3.犬的气管内插管 使犬侧卧,由助手尽量将犬的下颌拉开,拉出舌头,喉镜在舌面上向喉部推进,由于喉部通常被会厌盖住,使用喉镜片末端向上轻提软骨可使会厌前移暴露喉部,此时可使用局部麻醉剂防止喉痉挛。待喉部充分暴露后,将导管插入气管内。
4.猪的气管内插管 暴露猪的喉部较困难,操作时使动物仰卧保定,充分伸展头颈部,拉出舌头时注意避免舌头被牙齿损伤,尤其是雄性猪的犬牙,使喉镜在舌面上向喉部推进,必要时用导管内的导丝末端向下推软腭,进而和会厌分开,到达喉部时喷洒局部麻醉剂(利多卡因),拔出导丝后,导管继续前进,此时常遇到喉壁的阻挡,可微退导管,旋转90°后重新推进。该过程可能反复多次直至导管推进时无阻力感,如强行推进则可能导致严重的喉部损伤、出血以及继发窒息。
(三)注射麻醉
适用于各类非挥发性麻醉药物,应根据麻醉目的、药物的特性和动物特性选择相应的注射途径。
1.全身麻醉的注射途径 最常用的是静脉注射,体型较小的动物如啮齿类(大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠)由于静脉注射实施困难,多采用腹腔注射,部分药物可进行皮下或肌内注射。
静脉注射麻醉药物必须控制药物注入速度,宜缓慢,同时观察动物的麻醉程度,包括肌肉的紧张性、角膜反射和对皮肤刺激的反应,当这些活动明显减弱或消失时应立即停止注射。静脉注射时通常先注入用药量的2/3,视动物的麻醉程度注入余下的部分或全部药液。如需持续静脉输注,使用注射泵可更好地控制药物注入速度。如动物在注射时无法保持安静,则需要先行吸入麻醉诱导。
腹腔注射麻醉适用于一次性给药,操作简单易行,常用于啮齿类和兔。操作要点同腹腔注射给药。为了避免麻醉过深,一般也先注射计算药液总量的2/3,如动物已达到所需的麻醉深度,则不必再注射余下的药液,否则应视动物的麻醉深度适当追加注射。
2.局部麻醉的注射途径
(1)区域阻滞麻醉:是在麻醉区域的四周和底部注射麻醉药物,阻断痛觉向中枢传导。
(2)神经干(丛)阻滞麻醉:是在神经干(丛)周围注射麻醉药物,阻滞其传导,使其所支配的区域无痛觉。
(3)椎管内麻醉:是向椎管内注射麻醉药物,阻止脊神经的传导,使其所支配区域痛觉丧失。根据麻醉药物注射的不同部位,可分为蛛网膜下腔麻醉、硬脊膜外腔麻醉、骶管麻醉等,常用于大型实验动物如猪、羊等。
(四)其他麻醉方法
利用局部麻醉剂的组织穿透作用,将药物应用于组织表面,使药物透过黏膜,阻滞浅表神经末梢而达到麻醉目的。如药液点眼,鼻内涂敷,咽喉气管内喷雾,尿道灌注等,常用于鼻腔、口腔黏膜、眼结膜、尿道等部位的手术,这些方法均属于表面麻醉范畴。