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目的 优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的 特异性,获得更准确可靠的实验结果。

方法 使用 C57BL/ 6 小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改 良灌注冷冻前固定法 3 种方法制作冰冻切片,经免疫荧光染色后使用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察肺组织染色 情况。 使用荧光显微镜对肺组织切片进行全片扫描,计算单位面积内完整气道数量。

结果 传统冷冻后固定法制 作的小鼠肺组织冰冻切片,肺泡结构破坏,气道壁断裂严重,存在非特异性染色;冷冻前固定法制作的小鼠肺组织 切片,肺泡和气道结构相对完整,但肺泡塌陷,部分气道结构破坏;改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片, 肺泡和气道结构形态均完整、清晰,多重免疫荧光染色定位准确。 改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织冰冻 切片单位面积内完整气道(直径≥100 μm)数量高于冷冻前固定法((0. 66±0. 15) / mm 2 vs (0. 33±0. 14) / mm 2 ,P< 0. 05),也显著高于传统冷冻后固定法((0. 66±0. 15) / mm 2 vs (0. 02±0. 04) / mm 2 ,P<0. 01)。

结论 使用改良灌注 冷冻前固定法制作冰冻切片,利于保持小鼠肺组织形态完整,利于获得高质量的多重免疫荧光染色结果。

阅读原文：用于多重免疫荧光染色的小鼠肺组织冰冻切片制备方法优化研究.pdf