HTGP患者中肠道菌群变化[1] 

为研究HTGP患者特异性菌群差异，研究人员比较三组人群样本肠道菌群间的菌群丰度差异。相较于健康人群（HC）组，HTGP患者肠道菌群的α多样性显著降低（图1a），β多样性显示 HTGP、HTG及HC人群的肠道菌群组成与结构具有显著差异（图1b）。基于属、种水平分析，研究团队发现HTGP患者的肠球菌及大肠埃希菌等条件性致病菌丰度显著上调，而 Faecalibacterium prausnitzii，Faecalibacterium，Bacteroides uniformis 等有益菌丰度丰度显著下调（LDA>4, P<0.05）（图1d-f）。其中肠道菌群与HTGP病情严重程度具有相关性，如：Bacteroides uniformis及Bacteroides vulgatus与系统性并发症发生呈负相关（图1g），上述结果揭示了肠道菌群标志物在HTGP诊治中的临床价值。 

肠道菌群紊加重HTGP进展[1] 

为明确是否肠道菌群变化直接导致HTGP进展，研究人员利用FMT构建菌群人源化小鼠模型，并对FMT后各组小鼠进行病理学相关检测。结果显示：相较于移植健康人群组，移植HTGP患者粪便（FMT-HTGP）组小鼠的胰腺损伤程度、炎症指标（淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-1β）水平均显著升高（图2a-c）。16S检测发现FMT-HTGP组肠道菌群的α多样性显著降低（图2d），β多样性显示三组肠道菌群组成与结构具有显著差异（图2e）。基于种水平分析， Bacteroides uniformis同样在FMT-HTGP组中显著下调（P<0.05）（图2f-g）。 

肠道菌群通过调控胰腺NETs形成缓解HTGP进展[1] 

为证明肠道菌群对HTGP胰腺组织免疫细胞的调控，流式细胞术发现FMT-HTGP组小鼠胰腺中性粒细胞的募集与活化显著增强，CD45+Ly6g+细胞比例升高（图3a）。进一步利用免疫组化比较胰腺组织中性粒细胞的表达与分布，结果提示：Ly6g在FMT-HTGP组中表达显著上调（图3b）。转录组测序显示差异mRNA表达数据进行功能预测分析，提示FMT-HTGP组胰腺中的白细胞活化、中性粒细胞浸润及中性粒细胞脱颗粒等功能富集显著上调（图3b, d）。单细胞数据经过t-SNE降维聚类、差异表达基因分析，研究人员通过细胞注释获得13类细胞（图3e），同样印证了中性粒细胞在FMT-HTGP组中占比明显升高（图3f）。Cxcl2、Il23a、Ccl6、Ccl21等介导中性粒细胞趋化的基因在FMT-HTGP组上调，并发现介导NETs形成的关键基因Padi4、Cd177、MPO等在FMT-HTGP组中同样显著上调（图3g）。GSEA分析提示，相较于FMT-HC组，FMT-HTGP组中性粒细胞的NETs通路富集评分及其激活的关键基因更高（图3h, i）。提取两组小鼠外周血中性粒细胞，细胞染色SYTOX观察NETs形成差异，显示FMT-HTGP组NETs形成明显增强（图3j），胰腺组织内同样证实FMT-HTGP中NETs激活明显增强（图3k-l）。 

Bacteroidesuniformis通过抑制NETs形成来缓解HTGP[1] 

B.uniformis在HTGP患者和FMT-HTGP组明显降低（图4a-b）。为探究B.uniformis是否通过中性粒细胞发挥作用，研究者进行B.uniformis灌胃而后构建HTGP模型。结果发现：B.uniformis缓解HTGP胰腺损伤（图4c），减轻HTGP炎症反应。B.uniformis干预可缓解HTGP病程中胰腺中性粒细胞的过度募集及胰腺NETs形成（图4d, e）。 

此外，研究人员对抗生素处理后的Gpihbp1^-/-敲除鼠（赛业生物提供）构建HTGP模型进行B.uniformis干预（图4b），结果提示：相较于对照组小鼠，单菌干预组（B.U+HTGP）组小鼠的胰腺损伤程度、炎症指标等均显著降低（图42f, g）。进一步分析发现，在Gpihbp1^-/-敲除鼠中，B.uniformis同样有效抑制了中性粒细胞的募集与NETs的形成。CD45与Ly6g、CitH3与MPO免疫荧光双染证实，B.U+HTGP组胰腺组织中性粒细胞的募集与NETs形成显著减少（图4h-k）。综上，研究者发现B.uniformis可通过抑制中性粒细胞浸润及NETs形成，进而缓解HTGP。 

Bacteroidesuniformis衍生牛磺酸可缓解HTGP[1] 

在FMT试验中，研究人员分别对FMT-HC组与FMT-HTGP组血浆样本进行非靶向代谢组学测定，结果提示：粪便牛磺酸在FMT-HC组中表达水平升高（图5a），ELISA证实代谢组学结果（图5b），菌群-代谢相关性分析提示：B.uniformis可能通过促牛磺酸合成延缓HTGP进展（图5c）。在单菌试验中氨基酸靶向代谢组学测定，结果提示：粪便牛磺酸在B.U+HTGP组中表达水平升高（图5d），ELISA检测B.U+HTGP小鼠血浆牛磺酸水平同样高于对照组（图5e）。基于多组学研究结果，研究人员发现牛磺酸是肠道菌群缓解HTGP进展的关键代谢产物，随即验证牛磺酸在HTGP中的缓解作用（图5f）。相较于对照组（HTGP），给予HTGP小鼠牛磺酸饮用水干预周后，牛磺酸干预组（Tau+HTGP）小鼠胰腺损伤明显缓解（图5g），中性粒细胞比例表达下调（图5h），NETs形成显著减少（图5i, j）。 

此外，研究人员对Gpihbp1^-/-敲除鼠同样进行验证，证实牛磺酸干预组（B.U+HTGP）组小鼠的胰腺损伤程度显著降低（图5k）,中性粒细胞比例表达下调（图5l），NETs形成显著减少（图5m, n）。综上，研究者发现牛磺酸是B.uniformis干预后的关键菌群代谢产物，其可能通过肠屏障进入至血循环及胰腺组织中，依赖于中性粒细胞及NETs发挥抗炎作用。 

牛磺酸通过抑制NETs形成缓解HTGP[1] 

PAD4是NETs形成的关键基因，Pad4基因敲除小鼠（Pad4^-/-）是公认的NETs缺陷模型。为验证牛磺酸与HTGP病程中NETs形成的直接相关性，研究者利用Pad4敲除小鼠（赛业生物提供）构建HTGP模型，并分别予以牛磺酸或无菌水分别干预，共分为HTGP、Pad4^-/-+HTGP、Tau+Pad4^-/-+HTGP三组（图6a）。首先，研究人员发现抑制NETs形成可明显缓解HTGP进展，而对于Pad4^-/-小鼠构建的HTGP模型，牛磺酸干预并未起到明显的缓解作用（图6b-e）。此外，免疫荧光分析提示，Pad4^-/-+HTGP组小鼠胰腺组织及外周血中性粒细胞的活化和NETs形成显著减轻，而对牛磺酸干预对此小鼠无明显缓解作用（图6f）。同样，研究人员提取各组小鼠外周血中性粒细胞并观察体外NETs形成印证上述结论（图6j-i）。综上，研究人员进一步利用了Pad4敲除鼠构建HTGP-NETs缺陷模型，从动物水平证实牛磺酸对于HTGP病程中NETs形成的直接抑制作用。 

明确B.uniformis及牛磺酸在HTGP患者中的作用[1] 

基于上述研究，研究人员发现B.uniformis促牛磺酸合成抑制NETs形成在HTGP中的重要作用。为进一步明确上述菌群、代谢、免疫节点在HTGP诊治中的重要临床价值，研究者收集20名健康志愿者及30名HTGP患者临床血液样本并进行相关性分析（图7a）。血清ELISA证实健康人群的NETs水平显著低于HTGP患者，同时NETs水平与HTGP严重程度成正相关；健康人群的牛磺酸水平显著高于HTGP患者，与NETs水平呈显著负相关（图7b-c），B.uniformis丰度与血清牛磺酸水平呈正相关（图7b, d）。 

进一步研究发现，健康人群外周血中性粒细胞无明显NETs表现，而HTGP患者外周血可见明显NETs形成，提取HTGP患者外周血提取的PMN进行牛磺酸干预，发现HTGP+Tau组体外NETs形成明显减少（图7e）。此外，研究者提取小鼠外周血中性粒细胞，PMA体外诱导NETs形成，同时加入HC人群与HTGP患者血浆上清进行体外共培养，结果发现：相较于PMA诱导NETs形成组，健康人血清干预组NETs缓解，而HTGP患者血清干预组NETs并未缓解（图7f）。相较于PMA体外诱导NETs组，牛磺酸处理可导致中性粒细胞内磷酸化NF-κB蛋白水平显著降低（P<0.05），同时NF-κB和IL-17A的mRNA水平降低（图7g-i）。综上，研究人员从临床样本中证实了B.uniformis、牛磺酸、NETs形成的相关性，并进一步验证了健康人血清对NETs形成的缓解作用及牛磺酸抑制NETs形成的确切机制，发掘了B.uniformis及牛磺酸在HTGP治疗中的临床价值。 

该研究发现高甘油三酯血症性胰腺炎（HTGP）患者肠道单形拟杆菌（B.uniformis）丰度下调，导致其代谢产物牛磺酸水平降低，进而通过激活NF-κB、IL-17信号通路及促进结肠IL-17释放加速胰腺中性粒细胞胞外捕获网形成（NETs），最终加剧HTGP胰腺损伤。