学术文章
木糖葡萄球菌实时荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立及其应用
2024年04月10日
来源：中国实验动物学报2024年第1期
作者：于灵芝 冯丽萍 孔志豪 朱琦 魏晓锋
责任编辑：lascn
摘要：本研究拟建立一种灵敏快速的实时荧光定量 ＰＣＲ（ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ， ｑＰＣＲ）方法，用 于检测大、小鼠木糖葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ， Ｓ． ｘｙｌｏｓｕｓ）。
目的 本研究拟建立一种灵敏快速的实时荧光定量 ＰＣＲ（ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ， ｑＰＣＲ）方法，用 于检测大、小鼠木糖葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ， Ｓ． ｘｙｌｏｓｕｓ）。
方法 本研究选择特异性 ｇｅｈＭ 基因片段作为靶 标合成了一套引物，建立了木糖葡萄球菌检测的 ｑＰＣＲ 方法。 对木糖葡萄球菌标准菌株和其他非目标菌进行特异 性分析。 将木糖葡萄球菌的 ＤＮＡ 进行 １０ 倍稀释测定其灵敏度。 用送检的样本进行了临床应用并测序验证，同时 与培养法进行比较。
结果 仅木糖葡萄球菌出现特异性扩增曲线，而其他非目标菌未出现，表明设计的引物对木 糖葡萄球菌具有特异性，灵敏度为 １００ ｆｇ ／ μＬ，组内和组间重复性均小于 ３％。 共检测 ６０ 份临床样品，有 ５ 份样品扩 增曲线为典型的 Ｓ 曲线，将该 ｑＰＣＲ 产物克隆测序并进行同源性比对，该序列与木糖葡萄球菌的同源性为 ９９.６３％， 表明该样本木糖葡萄球菌核酸阳性，所检测样本阳性率为 ８.３％，而培养法的阳性率为 ６.７％，ｑＰＣＲ 方法阳性检出 率比培养法略高。
结论 建立的木糖葡萄球菌 ｑＰＣＲ 方法，具有快速、灵敏度高、特异性强和重复性好的优点，可用 于实验动物木糖葡萄球菌的检测。
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