学术文章
回毒银花散中各药及药物不同配比对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用研究
目的 研究 《 外科正宗》 中回毒银花散对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ( methicillin⁃resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑菌能力以及毒力因子 α-溶血素(α⁃hemolysin,Hla)活性和生物被膜形成的抑制作 用,同时探究回毒银花散最佳配比为古方新用提供实验支撑。
方法 通过最低抑菌浓度( minimum inhibitory concentration,MIC)、最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)、纸片扩散法(K⁃B 法)分析回毒银花散 及组方中各味药对 MRSA 菌株 USA300 的抑制效果,溶血实验、Hla 中和实验、Hla 寡聚实验、免疫印记( Western blot)实验验证药物以何种形式抑制毒力因子 Hla 的活性,生物被膜形成实验评价回毒银花散对生物被膜的抑制效 果,最后正交实验探究回毒银花散的最佳配比。
结果 回毒银花散抑制 MRSA 菌株,MIC90 为 64 mg / mL,MBC 为 256 mg / mL,抑菌圈直径为(7.50±0.50)mm。 回毒银花散还通过抑制 Hla 的释放抑制 Hla 的活性,最小有效浓度 (minimum effective concentration,MEC)为 16 mg / mL,抑制生物被膜形成的 MEC 为 8 mg / mL。 回毒银花散中金银 花、黄芪只影响 MRSA 溶血活性以及生物被膜形成但不抑制细菌的生长,两药溶血活性 MEC 以及生物被膜形成 MEC 均为 32 mg / mL;甘草抑菌能力较强,MIC90 为 8 mg / mL,生物被膜 MEC 为 1 mg / mL,在亚抑菌浓度下未表现出 抑制溶血活性。 最后正交实验显示,当回毒银花散中金银花、黄芪、甘草比例为 1 ∶ 2 ∶ 4 时,MIC90 为 16 mg / mL,溶 血活性 MEC 为 8 mg / mL,生物膜形成 MEC 为 4 mg / mL,均为 9 组中最低。
结论 回毒银花散在亚抑菌浓度下可影 响 MRSA 的溶血活性以及生物被膜形成,其中金银花、黄芪、甘草的最佳比例为 1 ∶ 2 ∶ 4。