实验方法
小鼠麻醉指导原则
本文是由ARC兽医人员设计的小鼠麻醉指导原则，旨在提供一般建议。这并不意味着它包含了适用于小鼠的所有可能药物组合的详尽列表。具体的麻醉方案应根据特定情况和研究需求与所在机构的兽医合作制定。
麻醉是使动物完全或部分失去感觉，伴随或不伴随意识丧失。动物可能需要麻醉进行手术、可能引起疼痛的非手术操作，或需要固定的非疼痛操作。在麻醉前、麻醉过程中和麻醉后，必须采取措施确保动物的安全和麻醉的有效性。
麻醉可通过胃肠外给药或吸入给药的方式进行。药物的选择取决于具体操作、研究目的和其他因素，如动物的年龄。对于新生小鼠，有些特别考虑下文进行了概述。如对药物选择有疑问，请咨询所在机构的兽医。
01 麻醉的一般指导原则和注意事项
适应期：建议所有动物在运输后适应一周，以防止应激引起的反应。动物至少需要72小时才能恢复到基本生理状态。
禁食：由于小鼠无法呕吐，通常麻醉前无需禁食。然而，如需禁食（例如为了保持体重），因小鼠的高代谢率，禁食时间不应超过2-3小时。请注意，切勿限制饮水。
眼睛保护：在麻醉状态下，小鼠的眼睛会持续睁开，可能导致角膜干燥和损伤。因此，在如下条件下，应涂抹眼膏（如Puralube® 或 Lacrilube®）来保护眼睛。
麻醉持续时间超过 5 min；
通过面罩进行麻醉。
监护：无论使用何种麻醉剂，均应监测麻醉状态下的小鼠，以确保心脏和呼吸功能不被过度抑制，以及麻醉深度适当。
在没有专用设备的情况下，可以监测以下麻醉小鼠的参数：
麻醉深度：通过掐指检查；
呼吸频率和模式：正常未受干扰的呼吸率约为 180 bpm，麻醉期间可接受 50% 的缓慢下降速率；
粘膜颜色：应为粉红色而非蓝色或灰色；
体温：可使用直肠温度计监测体温，体温应保持在 36℃ 以上；
血氧饱和度和心率：可用专用的啮齿类动物脉搏式血氧仪监测血氧饱和度 (> 95%) 和心率（300-800 bpm）；
如对监护或监护设备有任何问题，请与所在机构的兽医联系。
保温：所有种属在麻醉状态下均存在低体温的风险。小鼠由于体表面积与体重比高，尤其容易受到影响。低体温对动物会产生显著的生理应激，可能延长恢复时间并有潜在致命风险。
在所有麻醉过程中提供额外的保温措施。
补充热源包括循环水毯、电热垫和可在微波或水浴中加热的市售产品（如等温垫或凝胶加热器）。
切勿直接将动物放在热源上。
如对使用或购买额外的保温来源有疑问，请与您所在机构的兽医联系。
补液：在麻醉时间较长或动物患病、老年或虚弱的情况下，考虑腹腔或皮下注射温热的液体。更多信息请咨询您的兽医。
恢复：持续监测动物直至其完全恢复。
在干净的笼子里，将动物放在纸巾上（不使用垫料）。这样可以最大程度地减少气管阻塞或肺炎的风险。
麻醉后的动物单独放在一个笼子里进行恢复。
恢复期间继续提供额外的保温。
当动物能够走动时，将其送回原笼中子，并提供饲料和水。
根据所进行的手术，为了避免同笼伙伴啃缝线或切口处的创伤，小鼠可能需要在术后阶段单独饲养。任何单独饲养的计划都应包括在IACUC方案中，以便进行审查和批准。
02 麻醉药物和程序
吸入麻醉剂： 异氟烷是首选的吸入麻醉剂。 起效快、恢复可靠。
A. 吸入麻醉可以通过滴瓶法、诱导室、面罩或气管插管使用精密蒸汽器进行。
i.滴瓶法：
a.请勿使小鼠直接接触液体吸入麻醉剂（可通过在棉花或纱布上放置不可渗透的网格来实现）。
b. 由于无法控制室内的麻醉剂浓度，并且浓度可能迅速达到有毒水平，因此该方法仅适用于非常短的手术，如尾部活检、皮下肿瘤植入或面罩麻醉前的诱导。
ii.诱导室、面罩和气管插管：
a.这些需要配备氧气源和精密蒸发器的气体麻醉机。一些研究单位可能使用室内空气而不是纯氧作为气源，这也是可接受的。
b.蒸发器必须与特定的吸入麻醉剂兼容。
c.由于小鼠呼吸能力较小，使用非循环呼吸系统。
iii. 当使用吸入性麻醉时，使用通风柜或配备气体清除系统的麻醉系统，以尽量减少职业暴露于排出气体。
B. 注射麻醉剂：氯胺酮/赛拉嗪联合使用是小鼠的首选注射麻醉剂。
下面列出了其他常用的注射剂。
i. 小鼠对各种麻醉药的敏感性差异显著。 年龄、体质、品系、健康状况、基因调控和性别等因素都可能影响麻醉敏感性。以下剂量仅为一般指导原则，基于上述因素可能存在显著差异。在您的方案中添加麻醉剂时，建议提供一个范围，以允许根据每只动物的特定需求进行给药。
ii. 不建议在小鼠中进行肌肉注射（IM），因为可能导致组织刺激、跛行和自残等并发症。
*一个很好的初始方案是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉嗪。**阿替美唑（5 mg/mL）是右美托咪定（0.5 mg/mL）浓度的 10 倍。
您需要 4-6 倍于右美托咪定体积的阿替美唑（5 mg/mL）来逆转右美托咪定。然而，阿替美唑的安全范围非常高，因此如果逆转非常紧急，给予右美托咪定等体积的阿替美唑，可使阿替美唑的剂量增加 10 倍，这是安全的。
同样，使用与塞拉嗪（20 mg/mL）等体积的阿替美唑 (5 mg/mL) 逆转也有效。虽然塞拉嗪具有更高的浓度（20 mg/mL），但阿替美唑（5 mg/mL）更纯净，且与α2 受体结合更紧密，因此等体积逆转塞拉嗪也可行。
C. 注射麻醉剂的一种类型是局部麻醉剂。
i. 局麻药通过特异性结合神经细胞膜上的电压门控 Na + 通道来阻断神经冲动。
ii. 给药途径包括粘膜（鼻、眼等）局部给药或直接注射到组织和神经束周围。
iii. 在疼痛刺激（如切口）之前给予局部麻醉剂被认为是辅助镇痛药物，与阿片类和 非甾体抗炎药（NSAID）一起使用。
iv. 由于持续时间较短（数小时），不鼓励将局部麻醉剂作为主要镇痛药物使用，
03 对小鼠麻醉的特殊考虑：仔鼠麻醉
目前文献中描述了几种适用于新生啮齿动物的麻醉方法，包括注射麻醉、吸入麻醉和低温麻醉。
新生啮齿动物的麻醉会导致亲代啃食后代的问题。可通过确保新生仔鼠完全恢复后再归还给母鼠来减少这种情况。其他措施包括让幼仔接触来自于母鼠笼中的污染垫料，并将幼仔放在窝仔中间位置。
低温麻醉
低温麻醉只适用于7日龄以下的新生啮齿动物，并且不应用于持续时间超过30分钟的手术。
动物不应直接置于冰上（在动物和底层冰浴之间使用乳胶手套或其他物质）。
当足部反射消失时，动物已达到适当的麻醉水平。
手术过程中请勿使用白炽灯，因为它会使手术区域变热，导致动物从手术麻醉状态中苏醒。
麻醉后，动物应缓慢复温。快速升温可能会导致组织损伤。可使用循环水毯、加热垫 (40℃) 或培养箱 (33℃) 中给动物重新升温。
幼仔能够在无直接物理刺激的情况下移动后，可将其归还给母鼠。
吸入麻醉
新生啮齿动物可能比成年啮齿动物需要更长的吸入麻醉诱导时间。
在麻醉盒中进行诱导通常需 5% 异氟烷，维持（麻醉诱导盒或鼻锥）需 1-2%（流速 = 0.3-0.6 L/min）。
注射麻醉
氯胺酮/塞拉嗪是 7 日龄以上小鼠的推荐注射麻醉剂：通过 27g 针头 IP 注射 50-150 mg/kg 氯胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉嗪（最大体积 = 0.5 mL）。
对于7日龄以上的小鼠，推荐使用氯胺酮/塞拉嗪作为注射麻醉剂：使用27g针头腹腔注射50-150 mg/kg氯胺酮和5-10 mg/kg塞拉嗪（最大体积=0.5 ml）。
