实验方法
广西巴马小型猪繁殖性能研究
一、繁殖性能
(一)母猪繁殖性能
1. 0～4世代母猪繁殖性能 广西巴马小型猪母猪初情期120日龄左右(体重8～11kg)，发情周期18.7d，发情持续期4.95d，情期内安定期1～3d，休情期13.75d，妊娠期114.25d，乳头数11.16个。属多产小型猪，初产8头、经产10头左右。
2.16～18世代母猪繁殖特性 2004年10月至2006年4月对16～18世代广西巴马小型猪封闭群母猪发情周期和产仔特性进行了研究：
(1)母猪初情期日龄鉴定 对75、90、110、115、117、120日龄广西巴马小型猪小母猪进行阉割取出卵巢，观察卵巢排卵情况：75日龄卵巢非常小，其表面卵泡尚未发育(图3-12)；90日龄卵巢比75日龄的稍微大一些，但其表面卵泡还是非常小；110日龄卵巢比90日龄的又大一些，其表面卵泡已经开始生长；115日龄卵巢表面上的卵泡已经长大；117日龄卵巢表面卵泡长得非常大，准备排卵；120日龄两个卵巢表面各有一个红体，根据其形状判断其刚排卵1～2d。由此判断，广西巴马小型猪母猪第一次排卵在120日龄左右，即其初情期120日龄左右。
(2)发情周期期间母猪阴道上皮细胞核固缩指数变化规律 从图3-13可以看出，广西巴马小型猪发情期(第1～3天)阴道上皮细胞核固缩指数最高，其中发情第2天上皮细胞核固缩指数最高，达到51％；发情后期(第4～6天)阴道上皮细胞核固缩指数下降；间情期(第7～16天)上皮细胞核固缩指数低下，其中第7～11天最低，达到27％，之后缓慢上升；发情前期(第17～19天)阴道上皮细胞核固缩指数继续缓慢上升。发情期阴道上皮细胞核固缩指数(47％±9％)明显高于发情后期(36％±9％)、间情期(33％±7％)和发情前期(39％±6％)(P＜0.05)，而发情前期阴道上皮细胞核固缩指数又明显高于间情期(P＜0.05)(表3-4)。图3-13中广西巴马小型猪阴道上皮细胞核固缩指数变化曲线基本代表了其发情周期中血浆雌激素浓度的变化曲线：广西巴马小型猪母猪在发情期血浆雌激素浓度最高，然后缓慢下降，在间情期血浆雌激素浓度最低，在发情前期血浆雌激素浓度缓慢上升。本研究中巴马小型猪发情周期阴道上皮细胞核固缩指数变化所反映的血浆雌激素浓度变化规律与Hafez描述的(发情前第2d最高)不太一样，可能是由于巴马小型猪与家猪的品种差异导致的。根据阴道上皮细胞核固缩指数也可以判断巴马小型猪处于发情周期的具体阶段。
(3)母猪发情特性 对广西巴马小型猪母猪进行外部观察法和公猪试情法观测，发现：青年和断奶母猪的发情周期(n＝23)为19.0±1.5d，发情前期为2.7±0.7d，发情期为3.2±0.4d，发情后期为2.7±0.7d，间情期为10.3±2.1d。
部分体况较好的哺乳母猪在哺乳仔猪期间也会发情，哺乳期间发情的母猪占观察的哺乳母猪的69％(11/16)，这些哺乳母猪一般在产仔18d后开始陆续发情，在断奶前(即分娩后60d之前)的发情周期(n＝7)为21.1±2.2d。哺乳母猪的发情周期天数比青年和断奶母猪的发情周期天数长，差异极显著(P＜0.01)，也略长于普通家猪的发情周期(即19～20d)。
(4)母猪产仔性能统计分析 对广西巴马小型猪母猪产仔数据进行统计分析，结果如表3-5：青年和断奶母猪(n＝46)配种后的产仔数为7.9±2.2头/窝，仔猪(n＝363)个体出生重为0.53±0.13kg；对在哺乳期间发情的母猪(n＝5)进行配种，一个情期受胎率为100％，其妊娠期为117.8±0.84d，产仔数为9.4±1.1头/窝，仔猪(n＝47)个体出生重为0.61±0.15kg。哺乳母猪配种后的窝产仔数与青年和断奶母猪的相比差异不显著(P＞0.05)，但其配种后的仔猪个体出生重比青年和断奶母猪的重，差异极显著(P＝0.0001)。其妊娠期略长于普通家猪的平均妊娠期(即114d)。
(5)不同年龄母猪生殖激素水平的分析 随机选择3～4头2月龄雌性广西巴马小型猪，每隔7d采集血液样本一次，每头母猪采血3次(即21d，约一个发情周期)，每头每次采集血液样本10mL，在4℃冰箱中静置一个晚上，第2天用4000r/min离心，分离出血清.分装于0.5mL离心管中，存放在－80℃冰箱中待用。待这些猪分别长到1、6、8月龄时，用同样的方法采集血液样本和分离血清，存放在－80℃冰箱中待用。
通过大连泛邦化工技术开发有限公司购买了美国BPB生物药品有限公司的FSH、LH、孕酮的 ELISA酶免疫试剂盒、美国DR实验室的雌二醇和睾酮的ELISA酶免疫试剂盒，利用芬兰产的 PerkinElmer公司的Wallac 1420 Multilabel Counter多功能标记免疫测定系统，按照酶免疫试剂盒说明书，对不同年龄的雌性广西巴马小型猪血清生殖激素浓度进行测定，所有样品按双管测定分析。
雌性广西巴马小型猪血清激素测定结果如表3-6所示。
2、4、6、8月龄和产后5d母猪的血清促卵泡素(FSH)浓度分别为14.1±12.4ng/mL、51.9±54.0ng/mL、20.1±17.6ng/mL、9.2±8.3ng/mL、5.0±5.8ng/mL。从2月龄到4月龄，血清FSH浓度显著升高，4月龄后血清FSH浓度较明显下降。
2、4、6、8月龄和产后5d母猪的血清促黄体素(LH)浓度分别为1.5±3.2ng/mL、23.2±31.6ng/mL、7.3±10.8ng/mL、0.8±0.9ng/mL、2.3±4.5ng/mL。从2月龄到4月龄，血清LH浓度显著升高，4月龄后LH浓度显著下降。
2、4、6、8月龄和产后5d母猪的血清雌二醇(E2)浓度分别为0.2±0.2pg/mL、79.3±93.0pg/ mL、41.9±27.4pg/mL、21.8±16.3pg/mL、6.5±12.4pg/mL。从2月龄到4月龄，血清E2浓度显著升高，4月龄后E2浓度较快下降。
雌性广西巴马小型猪从2月龄到4月龄，血清FSH、LH、E2浓度(图3-14)都呈现出显著升高趋势，到4月龄时达到最大值，4月龄后又都呈现较明显下降趋势。
(二)公猪繁殖性能
1. 0～4世代公猪繁殖性能 广西巴马小型猪公猪5～7日龄出现嬉爬跨行为；36日龄阴茎能伸出包皮；50日龄左右常频繁地追逐、爬跨母猪，阴茎伸出并有白色分泌物。原产地在小公猪75日龄左右、体重7.5kg左右时，即开始令其配种，并能产生正常后代。中国地方猪种小公猪61～73日龄阴茎与包皮才开始分离，120～150日龄可使与配母猪妊娠产仔。
采集初生、10、20、30、40、50、60、90等日龄广西巴马小型猪各3头的睾丸、附睾，制作切片，光镜或电镜观察。主要结果(图3-15、图3-16、图3-17、表3-7)：29～30日龄睾丸曲细精管中已出现精子，48日龄附睾尾中已有精子。据报道，陆川猪60～70日龄、大花白猪60日龄、大围子猪50～70日龄出现精子。广西巴马小型猪公猪精液量(61mL/次)较其他中国地方猪种大，且精子密度(1.23亿/mL)也较高。
据报道，哥廷根小型公猪120～150日龄、美国小型公猪168～196日龄、嘉兴黑公猪和大围子公猪120日龄性成熟。可确认广西巴马小型猪公猪75日龄左右性成熟，属性成熟特早的猪种。
2. 16～18世代公猪繁殖特性
(1)公猪初情期检测 从2004年10月至2005年6月，历时9个月，每天半小时跟踪观察从5日龄开始的小公猪爬跨情况；为验证雄性广西巴马小型猪第一次产生精子的年龄，取出15、20、25、26、27、28、29、30、45、55、62、75日龄各2头小公猪睾丸，用10％福尔马林溶液固定，从睾丸头和尾各取1个样本，从睾丸中间部分取2个样本，用苏木精/伊红染色，制作成切片，检查睾丸曲细精管内精子的有无。
发现部分小公猪从14日龄开始就陆续有爬跨行为，在2月龄断奶前小公猪之间经常相互爬跨，甚至试图爬跨其母亲。如图3-17～图3-21所示，30日龄及年龄更小的小公猪的睾丸曲细精管中均没有精子形成，从45日龄及年龄更大的小公猪的睾丸曲细精管中均发现有精子(箭头所指之处)，而且随着年龄的增大，精子就越多。但30～40日龄之间未作切片，再加上小公猪头数较少，暂时还不能推翻以前29～30日龄睾丸曲细精管中首次出现精子的结论。因此，还可以初步断定，雄性广西巴马小型猪的初情期在30～45日龄。
(2)公猪精液物理性状和化学成分测定 用发情母猪作为台猪，人工采集了12～13头份广西巴马小型猪公猪精液。在广西大学动物繁殖研究所测定了一次射精量、酸碱度、渗透压、精子活率及活力、畸形率和密度后，再将样本送到广西壮族自治区分析测试研究中心，检测其物理性状和化学成分。
检测结果如表3-8所示，广西巴马小型猪公猪精液的主要物理性状：射精量107.5±39.0mL、酸碱度7.6±0.3、精子密度0.732亿/mL、精子活率0.754±0.079、精子活力0.376±0.168、精子畸形率0.256±0.159；主要化学成分含量：Na+ 1.56±0.13mg/mL、K+ 0.78±0.06mg/mL、Cl- 1.62±0.18mg/mL、磷脂8.7±0.2mg/100mL、果糖117.4±81.0mg/100mL、柠檬酸45.6±77.6mg/100mL。
(3)不同年龄公猪生殖激素水平的分析 随机选择4头2月龄雄性广西巴马小型猪，采集血液样本10mL，在4℃冰箱中静置一个晚上，第二天用4000r/min离心，分离出血清，分装于0.5mL离心管中，存放在－80℃冰箱中待用。待这些猪分别长到4、6、8月龄时，用同样的方法采集血液样本和分离血清，存放在－80℃冰箱中待用。
雄性巴马小型猪血清生殖激素测定结果如表3-9、图3-22所示。
2、4、6、8月龄公猪血清睾酮(TESTO)浓度分别为2.9±0.9ng/mL、10.8±3.3ng/mL、12.2±8.9ng/mL、4.9±1.2ng/mL。2～6月龄，血清TESTO水平呈上升的趋势，6月龄后血清TESTO浓度下降。
2、4、6、8月龄公猪血清促卵泡素(FSH)浓度分别为47.0±18.6ng/mL、54.8±9.2ng/mL、64.6±6.1ng/mL、48.5±13.7ng/mL。2～6月龄，血清FSH浓度呈逐渐上升的趋势，6月龄后FSH浓度下降。
2、4、6、8月龄公猪血清促黄体素(LH)浓度分别为42.3±11.2ng/mL、46.8±12.5ng/mL、37.5±7.8ng/mL、31.5±4.2ng/mL。2～4月龄，血清促LH浓度呈上升趋势，4月龄后LH浓度呈下降趋势。
二、繁殖性能遗传参数的估计
研究人员对9头广西巴马小型猪公猪的102窝女儿的繁殖性能有关遗传参数(遗传力、重复力和遗传相关)进行了估测。采用单元内父系半同胞相关法估测繁殖性能的遗传力，并以父系半同胞相关法估测值作比较；用组内相关法估测繁殖性能的重复力；用父系半同胞方差、协方差分析法估测了部分繁殖性能间的遗传相关，如表3-10所示，两种估测方法相比较，用单元内父系半同胞相关法估测的广西巴马小型猪繁殖性能遗传力，较用父系半同胞相关法低；但由于剔除了非遗传方差，其准确度较高。广西巴马小型猪20天窝重遗传力较高，为0.36，其余各项都较低为中等遗传力。t检验结果，其繁殖性能均为高的重复力。估测结果除乳头数遗传力较低外，其余和中国地方猪种及国外文献相近。
广西巴马小型猪繁殖性状间表型相关[rP(xy)]、遗传相关[rA(xy)]及环境相关[rE(xy)]如表3-11所示。产仔数与断奶仔数、断奶窝重，初生窝重与20d窝重呈强正遗传相关，20d窝重与断奶仔数、断奶窝重，断奶窝重与断奶个体重呈正遗传相关。以上估测结果是正确制定选种指标和早期选种的依据。
