目的 采用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离成年小鼠心肌细胞（ａｄｕｌｔ ｍｏｕｓｅ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，ＡＭＣＭｓ），并建立 腺病毒转染及缺氧／ 复氧诱导细胞损伤模型，为应用 ＡＭＣＭｓ 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作 性强的系统方法。

方法 应用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离 ＡＭＣＭｓ，观察贴壁后 ２、２４、４８ 及 ７２ ｈ 细胞的形态，计算存活 率，并应用 α⁃ａｃｔｉｎｉｎ 免疫荧光染色观察 ＡＭＣＭｓ 完整性；应用腺病毒转染 ＡＭＣＭｓ，观察并统计转染 ３６、４８ ｈ 后的转 染效率；通过缺氧 ４５ ｍｉｎ ／ 复氧 ２４ ｈ，进行碘化丙啶（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）染色，统计 ＰＩ 阳性细胞率以明确缺氧／ 复 氧损伤模型的建立。

结果 与 ＡＭＣＭｓ 贴壁后 ２ ｈ 相比，贴壁后 ２４ 和 ４８ ｈ 的细胞存活率无显著下降，贴壁后 ７２ ｈ 的细胞存活率显著下降；ＡＭＣＭｓ 细胞结构完整，可进行腺病毒转染，３６ 和 ４８ ｈ 转染效率分别可达 ８２.０７％ ± ０.６０％和 ８２.８４％ ± １.１８％；缺氧／ 复氧诱导 ＡＭＣＭｓ 可成功建立细胞损伤模型，ＰＩ 染色阳性细胞达 ４２.２８％ ± ３.１０％。

结论 本研究应用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离培养的 ＡＭＣＭｓ，细胞存活率高，并建立腺病毒转染和缺氧／ 复氧 诱导细胞损伤模型，为体外建立 ＡＭＣＭｓ 基因修饰、缺氧／ 复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。

阅读原文：成年小鼠心肌细胞腺病毒转染及缺氧／复氧诱导损伤模型的建立.pdf