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成年小鼠心肌细胞腺病毒转染及缺氧/复氧诱导损伤模型的建立

2024年06月19日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2024年第4期 作者:李笑汝 姚新叶 刘佳 张小玉 张依曼 来宝长 马强 王一东 田红燕 殷倩 责任编辑:lascn
摘要:采用非 Langendorff 方法分离成年小鼠心肌细胞(adult mouse cardiomyocytes,AMCMs),并建立 腺病毒转染及缺氧/ 复氧诱导细胞损伤模型,为应用 AMCMs 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作 性强的系统方法。

目的 采用非 Langendorff 方法分离成年小鼠心肌细胞(adult mouse cardiomyocytes,AMCMs),并建立 腺病毒转染及缺氧/ 复氧诱导细胞损伤模型,为应用 AMCMs 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作 性强的系统方法。

方法 应用非 Langendorff 方法分离 AMCMs,观察贴壁后 2、24、48 及 72 h 细胞的形态,计算存活 率,并应用 α⁃actinin 免疫荧光染色观察 AMCMs 完整性;应用腺病毒转染 AMCMs,观察并统计转染 36、48 h 后的转 染效率;通过缺氧 45 min / 复氧 24 h,进行碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色,统计 PI 阳性细胞率以明确缺氧/ 复 氧损伤模型的建立。

结果 与 AMCMs 贴壁后 2 h 相比,贴壁后 24 和 48 h 的细胞存活率无显著下降,贴壁后 72 h 的细胞存活率显著下降;AMCMs 细胞结构完整,可进行腺病毒转染,36 和 48 h 转染效率分别可达 82.07% ± 0.60%和 82.84% ± 1.18%;缺氧/ 复氧诱导 AMCMs 可成功建立细胞损伤模型,PI 染色阳性细胞达 42.28% ± 3.10%。

结论 本研究应用非 Langendorff 方法分离培养的 AMCMs,细胞存活率高,并建立腺病毒转染和缺氧/ 复氧 诱导细胞损伤模型,为体外建立 AMCMs 基因修饰、缺氧/ 复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。

阅读原文:成年小鼠心肌细胞腺病毒转染及缺氧/复氧诱导损伤模型的建立.pdf

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