学术文章
肝特异性Ｒｂｐ４基因敲除小鼠的建立及糖代谢特征分析
目的 建立肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因敲除小鼠模型，并初步探索肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因缺失对糖代谢的影 响。
方法 利用 Ｃｒｅ⁃ＬｏｘＰ 技术，使用 Ｃ５７ ／ ＢＬ６Ｊ 小鼠和 Ａｌｂ⁃Ｃｒｅ 小鼠构建肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因敲除小鼠模型。 利用 ＰＣＲ 及琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型。 选取 １０ 只 １８ 周龄 Ｃ５７ ／ ＢＬ６Ｊ 雄性小鼠为野生对照组（ＷＴ），１０ 只同周龄 ｆｌｏｘ 纯合且 Ａｌｂ⁃Ｃｒｅ 阴性小鼠为实验对照组（Ｒｂｐ４ ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ ：Ｃｒｅ － ），１０ 只同周龄 ｆｌｏｘ 纯合且 Ａｌｂ⁃Ｃｒｅ 阳性小鼠为实验组 （Ｒｂｐ４ ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ ：Ｃｒｅ ＋ ）。 分别利用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 及 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ 验证小鼠肝中 ＲＢＰ４ 蛋白及 Ｒｂｐ４ ｍＲＮＡ 表达水平。 利用 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ 检测其他组织中 Ｒｂｐ４ ｍＲＮＡ 表达水平。 采用苏木素⁃伊红（ＨＥ）染色观察肝组织形态。 利用血糖仪检测 小鼠尾静脉血液标本血糖值，进行葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验。 利用 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ 检测肝糖代谢基因磷酸烯醇丙 酮酸羧化酶（Ｐｅｐｃｋ）和葡萄糖⁃６⁃磷酸酶（Ｇ６ｐａｓｅ）表达水平。
结果 成功繁育并鉴定出肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因敲除小 鼠。 Ｒｂｐ４ ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ ：Ｃｒｅ ＋组小鼠肝中 ＲＢＰ４ 蛋白表达显著减少（Ｐ ＜ ０.０５），Ｒｂｐ４ ｍＲＮＡ 表达显著减少（Ｐ ＜ ０.０５）。 三组 小鼠脂肪、肾、胰、脾、心脏和肌肉组织中 Ｒｂｐ４ ｍＲＮＡ 的相对表达量差异无显著性（Ｐ ＞ ０.０５）。 ＨＥ 染色、葡萄糖耐 量及胰岛素耐量实验结果表明肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因敲除对肝组织形态、葡萄糖耐量及胰岛素耐量无显著影响（Ｐ ＞ ０.０５）。 三组小鼠肝中 Ｐｅｐｃｋ ｍＲＮＡ 表达差异具有显著性（Ｐ ＜ ０.０５），两两比较显示，Ｒｂｐ４ ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ ：Ｃｒｅ ＋ 组小鼠肝中 Ｐｅｐｃｋ ｍＲＮＡ 相对表达量较 Ｒｂｐ４ ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ ：Ｃｒｅ －组小鼠降低（Ｐ ＜ ０.０５）。 三组小鼠肝中 Ｇ６ｐａｓｅ ｍＲＮＡ 表达差异无显著 性（Ｐ ＞ ０.０５）。
结论 成功构建了肝特异性 Ｒｂｐ４ 基因敲除小鼠模型，基因缺失可抑制小鼠肝 Ｐｅｐｃｋ ｍＲＮＡ 表达， 为进一步探索该基因在小鼠糖代谢中的作用提供依据。
