学术文章
ＮＣＴＤ通过调控ＰＰＰ５Ｃ影响人白血病细胞增殖和凋亡的机制研究
目的 研究去甲斑蝥素（ ｎｏｒｃａｎｔｈａｒｉｄｉｎ，ＮＣＴＤ） 通过调控磷酸蛋白磷酸酶催化亚基 ５Ｃ（ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ５ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ，ＰＰＰ５Ｃ）对人白血病 ＮＢ４、Ｋ５６２ 细胞增殖、凋亡能力的影响及机制的初步研究。
方法 体外培养 ＮＢ４、Ｋ５６２ 细胞，电转 ＰＣ３.１ 和 ＰＰＰ５Ｃ⁃ＰＣ３.１ 质粒至 ＮＢ４、Ｋ５６２ 细胞，遗传霉素（ ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ，Ｇ４１８） 筛选 ＮＢ４、Ｋ５６２ 稳转细胞系。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和 ＲＴ⁃ｑＰＣＲ 实验检测 ＰＰＰ５Ｃ 蛋白和 ｍＲＮＡ 表达水平。 采用 ＣＣＫ⁃８、迁移实 验、Ｌｉｖｅ＆Ｄｅａｄ ＴＭ 动物细胞活力／ 毒性检测试剂盒分别检测 ＮＢ４、Ｋ５６２ 细胞的增殖能力、迁移能力和死细胞、活细胞 的数量。 将 ＮＢ４、Ｋ５６２ 稳转细胞分为 ０ μｇ ／ ｍＬ ＮＣＴＤ 组和不同浓度 ＮＣＴＤ 组，分别用含有 ０、８、１６、３２ μｇ ／ ｍＬ ＮＣＴＤ 的 １６４０ 培养基培养；Ｌｉｖｅ＆Ｄｅａｄ ＴＭ 动物细胞活力／ 毒性检测试剂盒检测死细胞率并对细胞形态进行拍照；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测各组细胞 ｃａｓｐａｓｅ ３、Ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ ３、ＪＮＫ、ｐ⁃ＪＮＫ、ｐ３８、ｐ⁃ｐ３８ 和 α⁃Ｔｕｂｕｌｉｎ 蛋白表达水平。
结果 ＮＢ４、 Ｋ５６２ 细胞转染后 ＰＰＰ５Ｃ 表达水平显著提高，细胞增殖能力、迁移能力、抗凋亡能力显著增强；与 ０ μｇ ／ ｍＬ ＮＣＴＤ 组 相比，ＮＣＴＤ 各浓度组会促进细胞凋亡，且呈剂量依赖性；ＰＰＰ５Ｃ 过表达拮抗 ＮＣＴＤ 对白血病细胞的杀伤作用；机制 研究发现 ＰＰＰ５Ｃ 通过去磷酸化修饰降低 ｐ⁃ＪＮＫ 的蛋白水平进而调控与细胞凋亡相关蛋白 Ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ ３ 的表 达。
结论 ＮＣＴＤ 能够通过调控 ＰＰＰ５Ｃ 分子促进 ＮＢ４、Ｋ５６２ 细胞凋亡，抑制细胞的增殖。
