学术文章
成年小鼠心肌细胞腺病毒转染及缺氧／复氧诱导损伤模型的建立
2024年06月19日
来源：中国实验动物学报2024年第4期
作者：李笑汝 姚新叶 刘佳 张小玉 张依曼 来宝长 马强 王一东 田红燕 殷倩
责任编辑：lascn
摘要：采用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离成年小鼠心肌细胞（ａｄｕｌｔ ｍｏｕｓｅ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，ＡＭＣＭｓ），并建立 腺病毒转染及缺氧／ 复氧诱导细胞损伤模型，为应用 ＡＭＣＭｓ 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作 性强的系统方法。
目的 采用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离成年小鼠心肌细胞（ａｄｕｌｔ ｍｏｕｓｅ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，ＡＭＣＭｓ），并建立 腺病毒转染及缺氧／ 复氧诱导细胞损伤模型，为应用 ＡＭＣＭｓ 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作 性强的系统方法。
方法 应用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离 ＡＭＣＭｓ，观察贴壁后 ２、２４、４８ 及 ７２ ｈ 细胞的形态，计算存活 率，并应用 α⁃ａｃｔｉｎｉｎ 免疫荧光染色观察 ＡＭＣＭｓ 完整性；应用腺病毒转染 ＡＭＣＭｓ，观察并统计转染 ３６、４８ ｈ 后的转 染效率；通过缺氧 ４５ ｍｉｎ ／ 复氧 ２４ ｈ，进行碘化丙啶（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）染色，统计 ＰＩ 阳性细胞率以明确缺氧／ 复 氧损伤模型的建立。
结果 与 ＡＭＣＭｓ 贴壁后 ２ ｈ 相比，贴壁后 ２４ 和 ４８ ｈ 的细胞存活率无显著下降，贴壁后 ７２ ｈ 的细胞存活率显著下降；ＡＭＣＭｓ 细胞结构完整，可进行腺病毒转染，３６ 和 ４８ ｈ 转染效率分别可达 ８２.０７％ ± ０.６０％和 ８２.８４％ ± １.１８％；缺氧／ 复氧诱导 ＡＭＣＭｓ 可成功建立细胞损伤模型，ＰＩ 染色阳性细胞达 ４２.２８％ ± ３.１０％。
结论 本研究应用非 Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ 方法分离培养的 ＡＭＣＭｓ，细胞存活率高，并建立腺病毒转染和缺氧／ 复氧 诱导细胞损伤模型，为体外建立 ＡＭＣＭｓ 基因修饰、缺氧／ 复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。
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