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目的 建立巨噬细胞特异性敲除 Ｋｒｕｐｐｅｌ 样因子 ２（ ｋｒｕｐｐｅｌ⁃ｌｉｋｅ ｆａｃｔｏｒ ２，ＫＬＦ２）基因小鼠模型，探讨 ＫＬＦ２ 对巨噬细胞炎症反应的调控作用。

方法 运用 ＣＲＩＳＰＲ／ Ｃａｓ９ 基因编辑技术构建 ＫＬＦ２ ^{ｆｌｏｘ ／ ＋} 小鼠。 通过与 Ｌｙｚ２⁃Ｃｒｅ ^{＋ ／ ＋}小鼠繁育得到目的基因型小鼠，通过基因型鉴定、实时荧光定量⁃聚合酶链反应（ ｑＲＴ⁃ＰＣＲ）、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 从 ＤＮＡ、 ＲＮＡ、 蛋 白 水 平 验 证 ＫＬＦ２ 敲 除 效 率。 分 离 培 养 小 鼠 骨 髓 源 巨 噬 细 胞 （ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ＢＭＤＭｓ），检测脂多糖（ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ） 诱导的炎症相关因子 ｍＲＮＡ 变化。

结果 建立了 ＫＬＦ２ ^{ｆｌｏｘ ／ ｆｌｏｘ} ／ Ｌｙｚ２⁃Ｃｒｅ ^＋基因型小鼠，即巨噬细胞特异性敲除 ＫＬＦ２ 基因。 小鼠骨髓、ＢＭＤＭｓ 的 ＫＬＦ２ ｍＲＮＡ 及蛋白水 平显著低于对照组小鼠，而心脏、肝、肾组织中 ＫＬＦ２ ｍＲＮＡ 表达较对照组小鼠无显著变化。 两组小鼠的体重、进 食、进水、形态无显著性差异。 在 ＬＰＳ 作用下，缺失 ＫＬＦ２ 的 ＢＭＤＭｓ 炎症相关基因 ＩＬ⁃６ ｍＲＮＡ 表达水平较对照组 显著下降，而 ＩＬ⁃１、ｉＮＯＳ、ＣＤ８６ ｍＲＮＡ 表达水平较对照组显著升高。

结论 本研究成功构建了巨噬细胞特异性敲 除 ＫＬＦ２ 小鼠模型，为进一步研究巨噬细胞 ＫＬＦ２ 对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。

阅读原文：巨噬细胞特异性敲除ＫＬＦ２基因小鼠模型构建与鉴定.pdf