巨噬细胞特异性敲除KLF2基因小鼠模型构建与鉴定

2024年06月20日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2024年第4期 作者:孟雪 王新洲 高水波 吴鸿 责任编辑:lascn
摘要:建立巨噬细胞特异性敲除 Kruppel 样因子 2( kruppel⁃like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨 KLF2 对巨噬细胞炎症反应的调控作用。

目的 建立巨噬细胞特异性敲除 Kruppel 样因子 2( kruppel⁃like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨 KLF2 对巨噬细胞炎症反应的调控作用。

方法 运用 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术构建 KLF2 flox / + 小鼠。 通过与 Lyz2⁃Cre + / +小鼠繁育得到目的基因型小鼠,通过基因型鉴定、实时荧光定量⁃聚合酶链反应( qRT⁃PCR)、Western Blot 从 DNA、 RNA、 蛋 白 水 平 验 证 KLF2 敲 除 效 率。 分 离 培 养 小 鼠 骨 髓 源 巨 噬 细 胞 ( bone marrow⁃derived macrophages,BMDMs),检测脂多糖( lipopolysaccharide,LPS) 诱导的炎症相关因子 mRNA 变化。

结果 建立了 KLF2 flox / flox / Lyz2⁃Cre 基因型小鼠,即巨噬细胞特异性敲除 KLF2 基因。 小鼠骨髓、BMDMs 的 KLF2 mRNA 及蛋白水 平显著低于对照组小鼠,而心脏、肝、肾组织中 KLF2 mRNA 表达较对照组小鼠无显著变化。 两组小鼠的体重、进 食、进水、形态无显著性差异。 在 LPS 作用下,缺失 KLF2 的 BMDMs 炎症相关基因 IL⁃6 mRNA 表达水平较对照组 显著下降,而 IL⁃1、iNOS、CD86 mRNA 表达水平较对照组显著升高。

结论 本研究成功构建了巨噬细胞特异性敲 除 KLF2 小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞 KLF2 对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。

阅读原文:巨噬细胞特异性敲除KLF2基因小鼠模型构建与鉴定.pdf

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