学术文章
斑马鱼快速骨质疏松模型方法的建立与优化
目的 本文通过比较常见斑马鱼骨质疏松（ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ，ＯＰ）模型不同建立方法，优化建立一种快 速、稳定、灵敏的造模方法。
方法 采用铁过载及泼尼松龙（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ，Ｐｒｅｄ）诱导 ＯＰ 模型，观察骨形成情况及动 物死亡率，分组为：空白对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ 组）、模型组（包括 ＦＡＣ 组和 Ｐｒｅｄ 组）、阳性对照组（ＡＣ 组）。 铁过载诱导法 采用枸橼 酸 铁 铵 （ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｆｅｒｒｉｃ ｃｉｔｒａｔｅ， ＦＡＣ） 为 造 模 药 物。 Ｐｒｅｄ 诱 导 法 有 Ｐｒｅｄ⁃３ 受 精 后 天 数 （ ｄａｙ ｐｏｓｔ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｄｐｆ）法，造模时间为 ３ ～ ９ ｄｐｆ；Ｐｒｅｄ⁃５ ｄｐｆ 法，造模时间为 ５ ～ １０ ｄｐｆ；Ｐｒｅｄ 撤药法，３ ｄｐｆ 开始造模，７ ～ ９ ｄｐｆ 每天撤去 １ ／ ３ 造模药物。 进而比较常用药物阿尔法骨化醇（ ａｌｆａｃａｌｃｉｄｏｌ，ＡＣ）、骨化三醇（ ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ，ＣＡ）、阿仑 膦酸钠（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ，ＡＬ）抗 ＯＰ 效应，选择稳定、灵敏的阳性药，并进一步对不同染色方法及染色条件进行优化。
结果 ＦＡＣ 在 ５００ μｇ ／ ｍＬ 剂量下未能观察到对骨形成的显著影响。 骨节数及第一椎骨长度结果显示，与 Ｃｏｎｔｒｏｌ 组比较，Ｐｒｅｄ⁃３ ｄｐｆ 诱导法 Ｐｒｅｄ 组均降低，具有显著性差异（Ｐ ＜ ０.０１，Ｐ ＜ ０.０５），但斑马鱼死亡率较高；Ｐｒｅｄ⁃５ ｄｐｆ 法无显著性差异；Ｐｒｅｄ 撤药法 Ｐｒｅｄ 组均降低，具有显著性差异（Ｐ ＜ ０.０１），且无死亡。 给予 ＡＣ、ＣＡ、ＡＬ 后均具有 抗 ＯＰ 作用，ＣＡ 抗 ＯＰ 作用更为灵敏、稳定。 茜素红（ａｌｉｚａｒｉｎ ｒｅｄ，ＡＲＳ）染色参数优化结果显示，染色浓度为 ０.０２％， 染色 ２ ｈ， ０.５％ ＫＯＨ 和甘油分别以（３ ∶ １，３ ｈ）和（１ ∶ １，１４ ｈ）洗涤条件为最佳。 染色对比结果显示，钙黄绿素对 骨节部位染色较为灵敏，ＡＲＳ 则对第一椎骨处染色较为灵敏。
结论 采用 Ｐｒｅｄ 撤药法可诱导建立快速、稳定、灵 敏的斑马鱼 ＯＰ 模型，是研究 ＯＰ 的稳定可靠模型。
