学术文章
基于免疫炎症－肠道微生态探讨清热解毒方对痛风小鼠治疗作用的研究
目的 探究清热解毒方对痛风小鼠抗炎作用及对肠道菌群的影响。
方法 将 ４０ 只 ７～ ８ 周龄、体重 ２０～ ２２ ｇ 的 ＳＰＦ 级 Ｃ５７ＢＬ／ ６ 雄性小鼠随机分为空白组（ＣＯＮ 组）、模型组（ＭＯＤ 组）、别嘌醇组（ＡＬＬＯ 组）、清热解 毒方组（ＱＲＪＤ 组），第 １～ ３５ 天每天早上 ＣＯＮ 组灌胃 １０ ｇ ／ ０.１ ｍＬ 羧甲基纤维素，其余各组均灌胃氧嗪酸钾（５００ ｍｇ ／ ｋｇ）＋酵母膏（１０ ｇ ／ ｋｇ）混悬液制备高尿酸血症小鼠模型；第 ２９ 天在异氟烷麻醉下，往 ＣＯＮ 组小鼠右踝关节注 射 ５０ μＬ 无菌羧甲基纤维素，其余各组小鼠右踝关节注射等量尿酸钠溶液（５０ ｍｇ ／ ｍＬ）制备痛风性关节炎模型，同 时各组每天灌服相应药物进行治疗；第 ３５ 天取材，取材小鼠禁食不禁水 ６ ｈ，检测血尿酸、血肌酐、尿素氮等血液指 标，踝关节苏木精－伊红、番红－固绿染色；踝关节免疫组化检测白细胞介素－１０（ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０，ＩＬ⁃１０）、转化生长因 子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ⁃β１，ＴＧＦ⁃β１）抗炎指标；收集小鼠盲肠内容物，采用 １６Ｓ ｒＤＮＡ 高通量测序法检测肠 道菌群变化。
结果 （１）用药治疗 ７ ｄ 后，与 ＭＯＤ 组相比，ＱＲＪＤ 组能有效降低疾病模型小鼠血尿酸（Ｐ＜０.００１）、 肌酐（Ｐ＜０.０１）、尿素氮（Ｐ＜０.０５）浓度，有效保护肾功能。 （２）病理结果提示，与 ＭＯＤ 组相比，苏木精－伊红染色发 现 ＱＲＪＤ 组治疗后，关节滑膜增生有所减少，炎症细胞浸润得到减轻；番红－固绿发现中药复方软骨排列较前有序， 软骨破坏较 ＭＯＤ 组减轻，基质未见失染。 （３）踝关节免疫组化结果提示 ＣＯＮ 组、ＭＯＤ 组 ＩＬ⁃１０、ＴＧＦ⁃β１ 未见明显 升高；与 ＭＯＤ 组相比，ＱＲＪＤ 组的 ＩＬ⁃１０、ＴＧＦ⁃β１ 表达升高（Ｐ＜０.０５）。 （４）肠道菌群交互关系、多样性上，与 ＣＯＮ 组 相比，ＭＯＤ 组特有的 ＯＴＵｓ 数目增加 ７５ 个，而 ＱＲＪＤ 能减少 ＭＯＤ 特有的 ＯＴＵｓ 数量，更接近 ＣＯＮ 组；４ 组间的 α 多 样性未见明显差异（Ｐ＞０.０５），而 β 多样性发现 ＱＲＪＤ 组的菌群组成更趋向于 ＣＯＮ 组水平（Ｐ ＝ ０.００１）。 （５）肠道 菌群差异分析结果显示，与 ＣＯＮ 组相比，ＭＯＤ 组 Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ｓｐｐ． 、Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｔｙｚｚｅｒｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｉｌｅｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ． 和 Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ ｓｐｐ． 等丰度增高（Ｐ＜ ０.０５）；与 ＭＯＤ 组对比，ＱＲＪＤ 组 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 和 Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ． 等丰度上升（Ｐ＜０.０５），且肠道菌群相互作用图显示菌群之间存在相互作用。 （６）肠道菌群与肾功 能、抗炎因子相关性分析中，Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｔｙｚｚｅｒｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ ｓｐｐ． 的相对丰度与 ＳＵＡ、ＳＣＲ 呈显著正相关 （Ｐ＜０.０５）；而 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｓｐｐ． 与 ＩＬ⁃１０、ＴＧＦ⁃β１ 抗炎因子呈正相关，其中与 ＴＧＦ⁃β１ 较为显著（Ｐ＜０.０５）。 （７）ＣＯＧ 功能预测提示 ＱＲＪＤ 组功能集中于无机离子转运和代谢、碳水化合物运输与代谢等。
结论 ＱＲＪＤ 能有效调节免疫炎症－肠道微生态紊乱从而治疗痛风疾病，推测其防治痛风的机制是调节 肠道菌群多样性以及调控 Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ｓｐｐ． 、Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 等差异菌群丰度实现治疗痛风的 目的。
