啮齿动物血生化项目分析(上)

2024年07月09日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物那些事儿公众号 作者:校审 苗晓青 责任编辑:lascn
摘要:血生化检测是对实验动物血液内离子、脂类、蛋白质和各种酶等物质浓度的检测。这些检测项目的变化一般都与特定器官的功能有关,对评估实验动物健康状态以及验证实验动物造模是否成功等,都具有重要指导意义。由于血生化涉及项目较多,本号将分两篇对其进行介绍。

血生化检测是对实验动物血液内离子、脂类、蛋白质和各种酶等物质浓度的检测。这些检测项目的变化一般都与特定器官的功能有关,对评估实验动物健康状态以及验证实验动物造模是否成功等,都具有重要指导意义。由于血生化涉及项目较多,本号将分两篇对其进行介绍。

绝大多数血生化检测都可以用血清或肝素血浆样本检测,两者的检测结果会有差异,但这种差异并无临床意义。然而,对于需要长期监测动物,相同指标应在监测周期内选择相同样本进行检测。样本的保存和抗凝剂的使用均应根据不同的检测项目进行选择。此外,样本采集的质量可直接影响检测结果。

对于大多数血生化项目,样本应在采集后及时检测,如不能及时检测,3天内可4℃或冷冻(-20℃或更低温度)保存;若保存时长超出3天,需冷冻(-20℃或更低温度)保存,切忌将样本反复冻融后进行检测。但一些生化项目低温保存也会影响其活性,如乳酸脱氢酶和谷草转氨酶。

尿素、钾、钠离子避免使用含铵盐类抗凝剂进行检测;谷丙转氨酶、肌酸激酶和总蛋白避免使用枸橼酸钠抗凝剂进行检测。本文仅列出部分生化项的抗凝剂选择,更多信息可参考WHO 2002年发布的《实验室检查中抗凝剂的使用》。

啮齿动物尤其实验大小鼠的血生化参考范围,目前仍没有建立标准参考。这与实验大小鼠的品系众多有关。已有文献证明,不同品系的小鼠血生化会有差异。并且血生化的结果与动物的年龄和性别等因素相关。另外,由于不同机构使用的检测方法不同,如干式生化分析仪和湿式生化分析仪,且使用试剂盒品牌不同、试剂盒检测原理不同等,均会导致结果不同。这些因素都导致了实验大小鼠的血生化标准参考范围无法建立,目前可查到的参考范围,均应根据内部情况进行参考。

蛋白质与肝胆功能检测

1.   总蛋白(Total protein, TP)

血液等体液中的蛋白质种类众多,但目前尚无一种常规检测技术可以对体液中各种类型蛋白质总量进行准确测定。因此,临床对体液中总蛋白质测定通常是假设所有的体液蛋白质均是单纯蛋白质,且各种体液蛋白与化学试剂的反应性均一致。基于以上两个假设,目前测定总蛋白最常用的方法有双缩脲法和紫外分光光度法。血清中的总蛋白实际检测的是除纤维蛋白原以外的成分,因此用血浆测定总蛋白较血清测定值偏高。

总蛋白的浓度主要反应肝脏合成功能和肾脏病变造成蛋白质丢失情况,可以用来判断机体的水合状态,脱水的动物总蛋白浓度会相对升高,即高蛋白血症。当动物出现慢性肝脏疾病、骨髓瘤、自身免疫性疾病、慢性炎症和感染等,会导致TP和球蛋白同时升高。

过度水合动物总蛋白浓度会相对降低,即低蛋白血症,此时动物可能会出现浮肿、胸腔或腹腔积液。TP和白蛋白同时降低常见于肝功能受损导致蛋白质合成减少、营养不良、蛋白丢失过多、消耗增加等病理性因素。

2.   白蛋白(Albumin, ALB)

ALB由肝实质   细胞合成分泌,是血浆中含量最多的蛋白质,大部分动物的白蛋白占血浆蛋白的35%~50%。ALB是动物机体内重要的营养蛋白,参与维持内环境稳定,也是血浆中多种物质的主要转运蛋白。当出现炎性疾病、浆细胞瘤、淋巴瘤、肾小球肾炎、营养不良、过度水合等,均会导致啮齿动物出现血清白蛋白的降低;ALB升高则多见于脱水动物。

3.   球蛋白(Globulin,GLB)

球蛋白可以分为α球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白,大多数α球蛋白和β球蛋白由肝脏合成,γ球蛋白由浆细胞合成。α球蛋白中比较重要的两种蛋白质分别是高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白;β球蛋白包括补体(C3、C4)、转铁蛋白和铁蛋白;γ球蛋白(即免疫球蛋白)包括IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球蛋白的浓度一般通过总蛋白与白蛋白的差值来进行计算。球蛋白减少主要由于合成减少,如使用免疫抑制剂;球蛋白的增加多见于γ球蛋白,常见原因有慢性肝脏疾病、免疫性疾病、骨髓瘤等。

4.   白蛋白/球蛋白(A/G)

白球比应结合蛋白质指标进行分析,不同种类、品系、年龄、性别动物的白球比都有差异,很多病理状态会改变白球比。当白蛋白和球蛋白均变化时,如出血导致白蛋白和球蛋白丢失、脱水导致球蛋白和白蛋白增加时,A/G比值将变化不大或保持在正常范围内;当其中一个数值发生变化且占主导时,那么A/G比值将发生异常,如免疫球蛋白的产生导致A/G比值降低、免疫球蛋白缺乏导致A/G比值增高。在临床上,ALB、TP、GLB和A/G比值应结合一起进行分析。

5.   谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)

临床上广泛用来作为肝细胞损伤指标,也是中间代谢的关键酶。ALT主要存在于肝脏,但也广泛存在于肾脏、心肌、骨骼肌、胰腺等组织中,这些组织出现损伤或坏死,也会导致血清ALT水平升高。由于ALT主要存在于细胞质,释放比较容易,因此ALT升高可出现在组织损伤早期。血液中ALT的水平与肝损伤的严重程度不呈现相关性,ALT通常会在肝损伤12h内升高,并在24~48h内达到峰值,除非存在慢性肝损伤,一般情况下血清ALT水平会在几周内恢复正常。比较特殊的是,豚鼠中ALT活性较低,因此ALT不适合用来作为判断其肝损伤的标志物。

目前已发现在人类、大小鼠和狗中,ALT具有两种亚型,分别为ALT1和ALT2,其中ALT1主要在肾脏、肝脏、脂肪和心组织中表达;而ALT2主要在肌肉和脂肪中表达。在小鼠中,ALT2被认为是脂肪变性的标志物。ALT亚型的区分可以更精准反应器官损伤情况,但目前ALT分型的检测尚未广泛应用在实验动物检测中。

6.   谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase, AST)

AST主要存在于肝细胞内,在正常大鼠血清中,细胞质中的AST约占总AST活性82%,线粒体膜上的AST约占总AST活性18%。此外,AST也存在于其他组织中,如心脏、骨骼肌、肾脏、胰腺等,这些组织损伤或坏死时,血清中AST也会升高。AST水平升高表示非特异性肝脏损伤,啮齿动物在应激状态或肌内注射也可能导致AST升高,AST升高应先检查血清或血浆样本是否溶血,结合肌酸激酶水平,排除是否为肌肉损伤导致AST升高,上述原因排除后,方可考虑为肝损伤导致AST升高。

7.   碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)

ALP是一组在酸性条件下水解磷酸单酯类化合物的酶,在许多组织中存在其同工酶,尤其是肝胆系统、骨骼内的成骨细胞、软骨内的成软骨细胞、肠道细胞。ALP水平与啮齿类动物的年龄及性别具有相关性,处于生长期的未成年动物ALP水平较高,随着动物年龄的增长,ALP水平明显降低;且大多数雌性动物ALP水平低于雄性动物。而ALP的病理性升高则常见于发生肝胆疾病、骨骼疾病、恶性肿瘤时的动物。

8.   γ-谷氨酰转移酶(Gamma-glutamyltransferase, GGT)

GGT存在于许多组织中,包括肾脏、胰腺、肠道和肌细胞。GGT升高多见于动物发生肝脏疾病、胆管阻塞以及急性胰腺炎等。需要注意的是,GGT在肾脏中浓度最高,但发生肾脏疾病时,GGT的增加并不明显,这是因为GGT会从受损的管状上皮细胞中释放到尿液中,而不是血液中。

9.   胆红素(Bilirubin, Bil)

胆红素是一种不可溶性分子,由脾脏内巨噬细胞降解血红蛋白产生,是各种含血红素蛋白中的血色素在一些系列酶作用下的降解产物,与脂类的消化吸收及黄疸形成具有重要关系。胆红素在光照下分解,因此,样本应避光保存以保证结果准确性。当动物出现胆汁运输障碍或肠道吸收不良时,会导致胆红素降低;当动物出现溶血性疾病导致红细胞破坏或内出血时,可使胆红素含量增高。

10.  胆汁酸(Bile acids, TBA)

啮齿动物的胆汁酸代谢与人类有所不同,大小鼠的胆汁酸以胆固醇为原料在肝细胞中合成,由肝源性分子组成,并主要与牛磺酸结合。胆汁酸可以促进脂类的消化吸收、调节胆固醇的代谢以及促进胆汁分泌。当动物出现肝功能受损、胆道阻塞等疾病时,均会导致胆汁酸水平增加。

肾脏功能检测

1. 尿素(Urea)

尿素是哺乳动物蛋白质代谢的主要终末产物,可自由滤过肾小球,当肾实质受损时,肾小球滤过率下降,血尿素浓度会升高,因此可以通过测定尿素水平来评估肾功能。需要注意的是,产尿酶菌(如金黄色葡萄球菌/变形杆菌属/克雷伯菌属)污染的血液样本可导致尿素分解,导致尿素水平下降,为避免这种情况,样本采集后应及时进行检测,如不能及时检测,应将样本放置在冰箱冷藏中保存。另外不同性别及年龄差异,也会影响尿素水平,随着动物年龄增长,尿素水平会呈现下降趋势。尿素的增加多见于高蛋白饮食、脱水以及肾功能衰竭等。

2. 肌酐(Ceatinine, Crea)

血肌酐经肾小球滤过进入原尿,并且不被肾小管重新吸收,机体内肌酐应保持恒定,因此测定血肌酐水平可以用来评估肾功能。但是和尿素一样,肌酐不是肾功能的准确指标,当肾功能损伤近75%时,方可引起血肌酐水平升高。肌酐降低则多见于动物营养不良、贫血等。

3. 尿酸(Uric acid, UA)

尿酸是嘌呤碱基代谢产物,主要存在于肝脏中,小部分可经肝脏随胆汁排泄。尿酸可自由滤过肾小球,也可肾小管排泄。因此,排除外源性尿酸干扰,血尿酸可反映肾小球滤过功能和肾小管重吸收功能。当机体出现急性或慢性肾炎、多发性骨髓瘤等均会导致UA升高;肝脏坏死、肝功能衰竭等病理原因则会导致UA降低。


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