目的 建立树鼩永生化角膜基质细胞（ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ，ＣＳＣｓ）系，并探讨其在病毒感染中的应用。

方法 利用组织块贴壁培养法分离培养树鼩原代 ＣＳＣｓ，将携带 ＳＶ４０Ｔ 基因的慢病毒转染细胞后，再挑取单克 隆进行传代培养，传至 ５０ 代以上进行形态学观察并与 ４０ 代细胞形态进行比较，波形蛋白（ ｖｉｍｅｎｔｉｎ）和 ＳＶ４０Ｔ 基因 免疫荧光鉴定、核型鉴定、细胞增殖曲线测定。 用单纯疱疹病毒 １ 型（ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ⁃１，ＨＳＶ⁃１） （ＭｃＫｒａｅ 株）、 寨卡病毒（Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ，ＺＩＫＶ）（ＧＺ０１ 株）、登革病毒Ⅱ型以及甲型流感病毒 Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８ 株）在该细胞上进行病毒感染 实验。

结果 传至 ５０ 代以上的树鼩永生化 ＣＳＣｓ 呈梭形，细胞形态结构与 ４０ 代相比仍较好。 ｖｉｍｅｎｔｉｎ 和 ＳＶ４０Ｔ 基 因免疫荧光表达阳性。 增殖曲线结果显示：细胞生长旺盛，第 ４ ～ ５ 天时处于对数生长期。 原代细胞核型的染色体 数稳定为 ６２ 条，而永生化细胞第 ２１、５６ 代突变为 ６４ 条且保持稳定。 病毒感染实验显示：树鼩永生化 ＣＳＣｓ 对 ＨＳＶ⁃ １（ＭｃＫｒａｅ 株）、ＺＩＫＶ（ＧＺ０１ 株）、登革病毒Ⅱ型以及 Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８ 株）病毒敏感，产生较高感染滴度，分别为 １.３２ × １０ ^５ 、５.６２ × １０ ^６ 、２.６９ × １０ ^７ 、７.７６ × １０ ^４ ＣＣＩＤ５０ ／ ｍＬ。

结论 成功建立了树鼩永生化 ＣＳＣｓ 细胞系，提示该细胞系 可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制及抗病毒药物的 研究。

阅读原文：树鼩角膜基质永生化细胞系的构建及其在病毒感染性方面的研究.pdf