动物实验常用技术标准操作规程(二)
实验动物抓取与固定
抓取和固定是实验动物和动物实验操作中的一项最基本的技术,几乎所有的实验动物 产繁殖与动物实验研究工作都需要限制实验动物的活动,使其保持安静状态,以便进行实验操作或正确记录实验动物的反映情况,同时也是为了保证饲养人员与研究人员的人身安全。
通常而言,同种动物的抓取和固定方法因实验的目的不同而各异,一般有 2~3 种;不同 类动物的抓取与固定方法也不尽一致。无论采取哪种方法,都应该遵守"保证人员绝对安 防止动物损伤、禁止粗暴对待实验动物"的基本原则。
由于实验动物害怕与人的身体发生直接接触,动物对于各种非条件性的剌激通常会进行防御性的反抗。因此, 在抓取、固定实验动物前应对其生活习性有所了解。抓取时首先应带着保护动物的原则,事先给一个暗示慢慢友好地接近实验动物,并注意观察其反应,让其有一个适应的过程,如果动物处于兴奋期,最好等待它安静下来再抓取,抓取动作要力求准确、迅速、熟练、争取在动物感到不安之前抓取到实验动物。
固定实验动物也应根据实验目的(给药部位或采血方法)选择最适合该种实验动物的固定方法(如用手还是用固定器来固定,是否需要助手的帮助)。在有手指被咬的危险时应带上毯,在大腿中间固定有被抓伤的危险时,要穿上工作裤,同时不要胆怯,要告诉助于在有危险的情况下如何防身,并尽早抓取和固定好动物。
1. 小鼠的抓取和固定
小鼠一般不咬人,但徒手操作时动作还是要轻缓。抓取时,用右手拇指和食指的指腹抓取尾部中央提起来放在笼子盖上,在动物向前挣扎的一瞬间,用左手的拇指和食指抓住颈背部到 背中央的皮肤,至两耳抓握到掌心即可,同时翻转抓住颈背部的左手,右手拉住小鼠尾部,再用左手的小指压住尾根部使小鼠整个呈一条直线,保持小鼠头部不能自由转动即可进行实验或自养操作。如果只想移动动物,就用两手捧起来即可。徒手操作主要防止因过分用力而使动物窒息或颈椎脱臼死亡,或因用力过小,导致动物头部能反转过来咬伤操作者的手。
用固定器固定时,则准备一个15~2Ocm 的方形木板,并在木板边缘各面契入钉子。在非麻醉状态下首先根据上述方法用左手将小鼠抓取,使用长度20~30cm的线绳,分别捆在四肢上;把捆在四肢的线绳固定到固定板的钉子上固定,并在头部上领切齿的地方牵一根线绳并固定,达到完全固定的效果。在静脉给药时,则应把小鼠放入适当大小和容量的容器里,只露出小鼠的尾巴即可操作。这种容器不仅能压住小鼠的尾根部,同时还可以起到驱赶血液、怒张血管的作用。
2. 大鼠的抓取和固定
大鼠的牙齿很尖锐锋利,突然袭击去抓它,很容易被咬伤手指;抓取而不及时固定,也有被咬伤的危险。4~5 周龄以内大鼠的抓取方法与小鼠一样只抓住尾部提起来即可。 对年龄相对较大的成年大鼠,因其尾部皮肤容易剥落,所以使用左手从背部中央到胸部捏起来抓住,即左手徒手按住大鼠,将食指放在颈背部,拇指及其他三指放在肋部,食指和中指夹住左前肢,分开大鼠前肢并举起来,右手按住四肢固定;对大鼠实施灌胃时,则用左手的拇指和食指抓住颈背部的皮肤,其余三指抓住背部皮肤,小指和无名指夹住尾部牢牢固定。
固定器固定大鼠的方法和小鼠一样,使用术制板和线绳或市售固定器。
3. 豚鼠的抓取和固定
豚鼠胆小易受惊 , 抓取时不能突然袭击。
抓取幼小豚鼠时,只需用两手捧起来即可。
成熟豚鼠则用左手的食指和中指放在颈背部的两侧,拇指和无名指放在肋部,分别用于夹住左右前肢大把抓起来,反转左手,用右手的拇指和食指夹住右后肢,用中指和无名指夹住左后肢使豚鼠整体伸直成一条直线。一个人进行以后的处置时,则坐在椅子上,把用右手拿着的豚鼠的后股夹在大腿处,用大腿代替右手夹住豚鼠。
用固定器固定豚鼠时,与小鼠固定器固定一样,使用木制板和线绳固定。
4. 家兔的抓取和固定
家兔与豚鼠一样,也是胆小易受惊,并且操作者容易被抓伤,故抓取时不能突然袭击。抓取时,操作者轻轻打开家兔笼门勿使其受惊,用一只手伸入笼内,从头前阻拦它跑动,用手轻轻地压住两耳并熟练大把抓住家兔颈背部皮肤并提起来,另一只手迅速托住家兔臀部拿出来,使家兔的重量大部分落于手上,实验兔呈座位姿势。移动时, 也采取同等手法抱着就 转运。
经家兔颈背部皮下用药时 , 则采取后台固定的方法抓住颈背部皮肤放在操作台上,另外一只手托住家兔的臀部进行固定。
经口给药时,用一只手抓着家兔颈背部皮肤,同时捏着双耳,不让家兔头部随意运动,开只手将抓住的两后肢夹在操作者的大腿之间,然后用空着的手抓住两前肢固定。
耳静脉给药或采血时使用金属制半圆形押回式家兔固定器(把家兔放在筒子里,只要前方露出头部,用转扭拧固定器固定动物);从颈动脉采血等情况下用木制的北岛式固定器(让家兔仰卧,用线绳依次将四肢捆在固定器两侧的金属棒上,把头部放在金属制的首枷和嘴环上固定);家兔热原试验时,使用首榈固定器(家兔在常态姿势下, 把颈部放在首搬上固定 )。
5. 地鼠的抓取和固定
地鼠的皮肤很松弛,可以在皮肤内完全翻转一周。因此,假若仅仅抓住少量皮肤,地鼠有时会翻过来咬人。抓取地鼠时可不戴手套,温暖的手使动物平静和放松。接近动物时,不要太突然。一定要使地鼠处于安静正常状态, 使其注意到自己的存在。假若地鼠受到惊吓,会猛扑向另外地鼠的背上,并相互发生撕咬造成地鼠受伤。
对已驯养并习惯于抓取固定动作的地鼠,可用手指合在一起呈杯状伸到笼内,把地鼠揪出,再用另一只手围住, 并将地鼠围在球形的手掌内,用一只手抓住地鼠的颈背部皮肤提起;对尚不习惯抓取动作的地鼠,抓取时尽可能抓紧地鼠颈部和肩肝部的大部分松软皮肤。
用固定器固定地鼠,则和大小鼠基本一样。
6. 犬的抓取与固定
犬的抓取方法较多。对未驯服和调教的圈养犬抓取时,可用特制的长柄铁钳固定犬的颈部,或使用长柄铁勾夹住犬颈部项圈,由助手将其缚住。对经驯服的犬,由一人打开犬笼从侧面靠近并轻轻抚摸颈背部皮毛,用双手将其抱住,由另一人用布带缚其嘴。或用皮革、金属丝或棉麻制成的口网,套在犬口部,并将其缚带结于耳后颈部,防止脱落。
扎犬嘴的方法是用一米左右的绷带兜住犬的下饭,绕到上领打一个结,再绕回下饭打第二个结,然后将布带引至后颈顶部打第三个节,并多系一个活结。
犬固定时一般采用仰卧位和腹卧位。仰卧位常用于颈、胸、腹、股等部位的实验,腹卧时用于作背、脑脊髓的实验。
慢性实验中固定犬时,将己驯服的犬拉上固定架上,将犬头和四肢绑住,再用粗棉带吊起犬的胸部和下腹部,固定在架的横梁上,即可进行体检、灌胃、采血、注射等实验操作。
急性实验中固定犬时,将己麻醉犬嘴上的绷带解开,把犬放在实验台上,先固定头部固定四肢;在固定犬头部时,用特制的犬头固定器。犬头固定器为一圆铁圈,圈的中央横有两 铁条,上面的一根略弯曲,与棒螺丝相连,下面一根是平直的;固定时先将犬舌拉出,将犬嘴入铁圈,再将平直铁条横贯在上、下领之间,然后向下旋转棒螺丝, 使弯形铁条压在犬的鼻上,将铁柄固定在实验台的铁柱上;在固定四肢时,先用粗棉带的一端缚扎于犬腕关节和踝关节以上的部位,如采取仰卧位,可将两后肢左右分开,分别固定于手术台两侧的木钩上;然后,将犬左右前肢的两条棉带从犬背后交叉穿过,分别固定于两侧术钩上。缚扎四肢的结扣方法是在活扣外再打一个活结,便于实验结束后的松绑。
7. 猪的抓取与固定
(l) 抓取 从背后紧抓猪的两耳,将其提起后,使其臀部着地,此时猪的膝部合拢,将其躯干压在身下即可。
(2) 固定 将猪仰放在"V"字型器械内进行固定,也可用木制金属架和帆布吊兜来固定倒猪。用固定架时,使猪背卧,四肢用棉绳固定在三角架的四角边上。如没有三角架,也可犬台。帆布吊兜可根据猪的大小设计成一长方形的布兜,中央四层,四周八层,中央开五个口,以便插入四肢及排便。将布兜固定在金属固定架上,活动板上升到猪可站立的高度,以减 轻股体的压力。
8. 猴的抓取与固定
(l) 抓取 从笼内抓取猴时,饲养人员应以右手持短柄网罩,左臂紧靠门侧,以防笼门敞开时猴逃出笼外,由上而下罩捕。当猴被罩住后,应立即将网罩翻转扣住猴取出笼外,然后将网罩反扣在地上 , 由罩外抓住猴的颈部 , 轻掀网罩 , 再反转提取猴的双手臂 , 此时猴便无法逃脱。在室内或大笼内抓取时 , 则需要两人操作。用长柄网罩 , 最好一次罩住 , 因为猴受惊后 , 第 二次抓取更为困难。网罩可用麻线编成 , 先用 0.8~1.2cm 粗的圆铁杆弯成腰圆形后 , 长径约 15cm,宽径约 30cm, 木柄长 40cm。在室内捉取用的网罩 , 其木柄可以适当加长。笼养的猴 , 可 利用猴笼的活动推板 , 将猴推压至一端 , 抓取、固定。慢性实验用猴可给其带上铁链条 , 需要抓取时 , 只需要将铁链条抽紧固定于笼壁 , 反背其双臂提出即可。
(2) 固定 徒手固定时 , 将猴两前肢反扣在其背后 , 操作者用一只手握着 , 用另一只手将 棚后肢捉住 , 即可将猴固定。固定器固定时 , 一般是采用 " 猴限制椅 " 或称 " 猴固定架 " 进行 固定。