实验方法
动物实验常用技术标准操作规程(一)&动物检疫
2015年02月13日
来源:实验动物管理与实用技术手册
作者:徐国景 唐利军 易工城 孔利佳
责任编辑:admin
摘要:动物检疫(animal quarantine)。按照国家法规对各种动物及其产品进行的疫病检查。通过动物检疫,对可疑或已证实的疫病对象实行强制隔离,或作出适当处理,目的是防止动物传染病的传播,保障畜牧业生产和人民健康。
( 一 ) 检疫的意义
当一个新的实验动物设施建好后,需要从其他的生产设施引进实验动物种群供生产知使用或供动物实验研究使用,显然,新引进的实验动物对新的动物设施是一种威胁,包括微生物、寄生虫、环境条件、遗传控制及饲养管理等多方面的威胁。因此,首要的事情是需要了解新到达的实验动物的微生物背景及其对新动物设施的适应性问题。
实验动物的检疫是剔除不合格实验动物、保证实验动物和动物实验质量的第一道防线,并可以减少人畜共患病对工作人员的健康威胁。对新到的实验动物进行隔离检疫,不仅可被实验动物活动性感染的可能性,还有利于实验动物从运输疲劳中恢复过来,并适应新环境(新的研究表明:小鼠运输到新的饲养环境后48h内部分免疫功能发生变化,皮质酮水平高)。所以,实验动物检疫室作为实验动物设施不可或缺的部分,在引进外来实验动物种群用于生产或引进外单位实验动物用于动物实验的过程中具有重要的意义。
( 二 ) 检疫的方法
实验动物的检疫有主动检疫与被动检疫两种。被动检疫将实验动物隔离观察7~28d,以观察实验动物的临床体征为主;主动检疫是指主动检查实验动物或实验动物组织是否存在有做生物的方法。在许多情况下,只有从非商业渠道、或者从最近可疑的渠道接受的实验动物才需要进行主动检疫;而商业性的实验动物生产基地由于定期或不定期对其生产群体进行过质量检测,所生产的实验动物健康状况可以满足实验要求或繁殖生产需要,只需要在实验动物到达新设施后经过专业兽医的常规检查验收即可,没有必要对每批新引进的实验动物都进行主动检疫。但对普通级实验动物特别如犬、猴、家兔、小型猪、豚鼠而言,则应隔离观察,确认无临床不适后方能在动物生产或动物实验中使用。
( 三 ) 检疫程序
实验动物检疫程序因实验动物的来源、引进之实验动物的使用目的不同,其检疫侧重点有所不同。专职兽医经常采用视诊和触诊相结合检查方法,通过观察实验动物的临床症状,来判定该批实验动物对新环境的适应性及身体健康状况。
视诊时,若发现动物精神及食欲出现沉默、倦怠、动作不活泼、食欲不振、拒食;营养状态出 现消瘦、肥胖; 体格与姿势出现异常,行走与站立困难;步态出现麻痹、运动失调,跛行;呼吸出现呼吸困难,咳嗽;体表出现毛少、脱毛、外伤或有痴皮的形成;出现鼻涕、恶露;动物习惯出现异食癖等现象时,通常要引起高度警惕,并做进一步的确诊。
体表触诊则一般进行实验动物脉搏的检查,接触动物的皮肤、被毛、淋巴结、骨髓等体表变化;体内触诊包括对口腔内黏膜、牙齿、牙周组织、舌等口腔检查和触感(弹性、硬度、肿胀、疼痛等)检查。
1.SPF级、清洁级、悉生级、无菌级实验动物的检疫
由于引进的SPF级、清洁级、悉生级、无菌级实验动物会定期在生产、繁殖单位进行微生物学检测,所以引进到动物实验场所或新的繁殖生产基地的实验动物,应有该生产机构提供 的实验动物生产许可证及实验动物质量合格证或最近的实验动物质量检测报告。用于动物实 验研究的实验动物应隔离观察1周左右,重点观察一般临床症状和体重变化;用于动物生产繁殖、扩大种群生产的实验动物,还需要生产单位提供种子动物的病原微生物学与生物遗传学背景检测资料。有条件的单位应自行抽样检查部分重要的微生物学项目,以判定实验动物是否合格。用于生产繁殖的实验动物应隔离观察1个月左右 主要观察一般临床症状、体重变化及对营养的适应性等指标。以外购的研究用SPF级动物检疫为例,其检疫程序如下 :
(1) 外购的SPF级动物通过动物传递窗拆包、消毒进入检疫室,并由专职兽医人员在检疫室中对动物进行检疫。
(2)将装动物的饲养盒放在检疫台上。兽医人员先对整群动物进行观察,检查动物的精神状况、外貌、营养、立卧姿势、呼吸等情况。发现有异常的动物,须从运输笼中拿出放在空饲养盒中,以便进一步检查。
(3) 将事先消毒好的、分装动物的饲养盒放在检疫台上,将精确到0.1g或1g 的电子秤(通常称大小鼠)调试好放在检疫台上。
(4) 先将1只动物从饲养盒中抓出,放入1个空饲养盒,按事先设计好的实验动物检疫报 告书中所要求的项目进行检查,无异常的,称取体重,并做记录。符合体重要求的,放入1个饲 养鱼,不符合体重要求的放入另1个饲养盒; 有异常的动物要单独放1个饲养盒饲养,按此方 法逐一对动物进行检查。
(5) 检查结束后,在饲养盒中加上饲料和饮水。大鼠在检疫室中饲养5~7d、小鼠饲养3~5d,兽医人员每天填写检疫记录表,检疫合格的动物,交由实验人员接收后方可进入饲养观察室,由观察室责任人负责饲养与管理。
(6) 检疫结束后由兽医人员填写实验动物检疫报告书,并将填写完成的检疫报告书报动物室主管签字后,交专题实验负责人留存。
2. 普通级实验动物的检疫
豚鼠、家兔、犬、猫、猴等普通级实验动物到达新的实验动物生产或动物实验设施后,实验动物需要在新设施的检疫饲养室进行一段时间的检疫观察,由专职兽医进行检疫并提供报告。检疫工作包括体重测量和临床症状的观察。通过进一步地检查细菌、病毒、血清反应、变态反应、寄生虫来进行病因诊断,有时也可以进行病理组织学的检查、尿的生化检查和血泪 临床生物化学指标的检查。
外购的普通级动物,首先放在检疫室外的走廊或放在缓冲间,通知饲养室责任人及质保人 员到现场,兽医人员用 0.5%的优碘或0.5%的"84"消毒液对运输笼进行擦拭消毒,不同种类动物具体的检疫程序如下。
(1) 外购犬的检疫
1)将犬从运输笼中抓住,放在一大小为48cm×35cm×20cm的塑料盒中,按实验动物检捷报告书中的项目进行检查、记录,并按动物购买通知单的要求进行核对。无异常的动物, 电子秤称量体重编号并做记录。
2) 称重、编号后的犬送入清洗间,用中性沐浴露进行热水浴,然后用浴巾擦干身体,挂上编号牌,记录相关信息。
3) 进入检疫室的犬,在动物笼具上插入填写好的标示牌,然后送入检疫室继续检疫,异常动物放入隔离室进行检疫,体重不符合要求的,在笼具上做好标记,以便再查。
(2) 外购普通级兔、豚鼠的检疫将动物从运输笼中抓出,送人检疫室,放在一大小为48cm×35cm×2Ocm的塑料盒中,按实验动物检疫报告书中的项目进行检查、记录,并按动物购买通知单的要求进行核对。无异常的动物, 用电子秤称量体重后放入饲养笼中饲养。异常动物则放入隔离室进行检疫,体重不符合要求的,在笼具上做好标记,以便再查。用此种方法逐一对动物进行检查。动物运输笼不进入检疫室,拿出做消毒处理,以备下次再用。
检查结束后,对长途运输的动物先喂给少量温开水,两小时后加喂半量饲料。
外购普通级动物兔、豚鼠的检疫时间为1~2周,犬的检疫时间为2~3周。检疫期间,兽医人员每日早、中、晚三次对被检疫的动物进行观察,并填写检疫记录表。
检疫结束后,符合要求的动物由实验人员接收后开始实验。由兽医人员填写检疫报告书,填写完成的检疫报告书报动物室主管签字后,交专题实验负责人留存。
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