( 三 ) 精子的采集与分离

小动物(如小鼠、大鼠等) 一般采取处死动物,然后从附睾中采集精子。

较大动物(如兔、猪等)则用采精的方法获得精子。

具体操作见本章第一节。

精液中含有大量精浆,其中不乏精子获能的抑制因子,在体外受精前必须将其去掉。精子分离的方法主要有:悬浮法、玻璃棉过滤法、密度梯度离心法和离心洗涤法。常用的是离心洗涤法。 

( 四 ) 精子的体外获能

精子成熟后,虽然具有一定的活力,但却没有受精的能力。精子在通过雌性生殖道过程中,经历了一系列生理、生化的变化,获得了受精能力,这个过程称为精子获能(sperm capacitation )。采集到的精子,未经过雌性生殖道的一系列生理、生化变化,因此需要体外获能处理。

目前精子的获能处理方法主要有以下几种。

1. 与血清白蛋白的溶液长时间孵育

血清白蛋白是血清中的大分子物质,具有很强的结合胆固醇和锌离子的能力,可除去精子质膜中的分部胆固醇和锌离子,降低胆固醇在精子质膜中的比例,进而改变精子质膜的稳定性,导致精子的获能。该法由于需要的时间较长,且诱发精子获能的作用不强,故仅在体外受精技术研究的初期进行过尝试,具有一定作用,目前仅作为精子获能的一种辅助手段。

2. 与含有卵泡液的培养液进行孵育

卵泡液含有来自血清的大分子物质,且含有诱发精子获能和顶体反应的因子,故在培养液中添加一定浓度的卵泡液能诱发精子的获能。