小鼠体外受精的技术程序,如下图。

（一）卵母细胞的采集

按第二节所介绍的方法,对小鼠进行超数排卵处理。注射 HCG 后13～ 14h 从输卵管内采集卵母细胞。方法 同第二节"小鼠的胚胎移植"所述。采集到的卵母细胞一卵丘复合体用用0.1% 透明质酸酶去除卵丘细胞,然后放入TYH 液滴中。

( 二 ) 精子的采集与获能 

按本章第一节所述的方法从附睾中采集小鼠的精子,或用假阴道法和电激法采精。将精液用TYH 液离心洗涤2～3次,然后置于TYH 液滴中,37℃、5%C02中培养矶,使精子获能。将获能后的精液转移到含有卵母细胞的TYH液滴中,最终使溶液的精子浓度达 4×106个/ml。

( 三 ) 体外受精

含有卵母细胞和获能精子的TYH液滴置于37℃、5%C02中孵育6～8h,使其完成体外受精。从培养箱中取出培养皿;用 TYH 液洗涤处理后的卵母细胞。此时,受精后的卵母细胞可以观察到第二极体以及两个原核。

( 四 ) 受精卵培养

受精卵继续在TYH液滴、37℃、5%C02中培养 24～28h,镜检可见发育成 2～4 细胞的卵裂球。将这些发育的卵裂球转到 BMOC-3、TYH或 Ham’s F-10 中洗 2～3 次,然后在相应的培养液中继续培养,以发育到大约20 个卵裂球为宜。

( 五 ) 胚胎移植

按本章第二节所述的方法,将体外受精的胚胎移入假孕受体母鼠的输卵管内。