( 一 ) 卵母细胞收集

成熟 SD 品系大鼠,腹腔注射PMSG2O～3OIU,48h 后注射HCG20～30IU。在 HCG 注射后 12h 左右,自输卵管收集卵母细胞一卵丘复合体,用0.1% 透明质酸酶去除卵丘细胞。都在PMSG 注射后44h 杀死大鼠,取其卵巢,自卵巢表面大卵泡中抽取卵母细胞一卵丘复合体;这时卵处于 GV(生发泡期)期。体外培养 2～3h 后,卵母细胞发生GVBD(生发泡破裂);6～7h后,主要处于前中期 I 和中期 I;8～1Oh 后进入后期I或末期I;12h后开始成熟,进入MⅡ 期。

( 二 ) 精子处理

对已被证实是可育的雄鼠处死后,取附辜尾管连同1cm 输精管,用镊子将精子挤出,置于一滴培养液中。将这滴精子轻轻移至石蜡油覆盖的0.6ml培养液的小试管底部,使精子扩散2～3min。然后取上层活跃的精子(约150µl)并稀释计数,稀释至 1.25 × 106个/ml 精子。将精液移到含肝素(5mg/ml)的培养液中。

( 三 ) 受精

将 4Oµl精液加入到含卵母细胞的 5Oµl培养液中(其中加有5mg/ml肝素),使精子最终浓度约为 5×105个/ml。通常精子在培养液中培养 15～3Omin 即可加入到受精滴中。加人精子后 14～18h,检查受精情况。