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二、小鼠的胚胎移植

( 一 ) 供体的超数排卵 

腹腔注射10IU PMSG，相隔48h后，再腹腔注射等量HGG，当日与正常雄鼠1：1合笼交配，次日检栓（阴道涂片观察），见栓当日为妊娠第1日。

( 二 ) 假孕母鼠的制备

制备假孕母鼠首先要获得结扎公鼠。将 6～8 周龄的公鼠,麻醉,腹部手术,将两侧的输管结扎,缝合,休息 4 周以上备用。在供体小鼠合笼的同一天,将准备作受体的雌性小鼠与扎公鼠合笼(1:1)。第二天清晨检查阴栓,有阴道栓者为假孕母鼠。

( 三 ) 胚胎采集

1. 输卵管采胚

1～8 细胞期的胚胎应在输卵管采集,在妊娠第1～2 天进行。将供卵鼠断颈处死,75%精消毒后剖开腹腔,取下输卵管,置于有 PBS 的平皿中,实体显微镜下用针划破输卵管壶腹部使胚胎释放出来,并在镜下收集胚胎;清洗后置于有PBS液滴的培养皿中,放入 37℃、5%CO2培养箱中温育2～3h,进行移植或继续培养观察。

2. 子宫角采胚

16 细胞期以上发育阶段的胚胎应在子宫角采集,在妊娠第3～4 天进行。将供卵鼠断颈处死,75% 酒精消毒后剖开腹腔,剪下全段子宫,置于有 PBS 的平皿中;实体显微镜下用注射器冲洗胚胎;检胚后将胚胎置于 M2 液滴的培养皿中,放人37 ℃、5%C02 培养箱中温育2～3h，进行移植。