广东省实验动物信息网

哺乳动物体外受精的过程包括卵母细胞的收集和体外成熟、精子的采集和体外获能、体外受精、受精卵的体外培养和胚胎移植等步骤。

( 一 ) 卵母细胞的收集

小动物(如小鼠、大鼠等): 一般采取经超数排卵处理后,处死动物,然后从输卵管壶腰部收集卵母细胞。

较大动物(如兔、猪等): 一般用手术的方法从输卵管内、或从离体的卵巢中收集卵母细胞。从离体的卵巢收集的方法有卵泡抽吸法和卵巢解剖法这两种方法。

卵泡抽吸法 : 用注射器的针头插入卵巢表面的卵泡抽吸卵母细胞;

卵巢解剖法 : 用手术刀将卵巢切成两半,去掉中间的髓质部分,露出卵泡,划破卵泡,在培养液中反复冲洗,采集其中的卵母细胞

( 二 ) 卵母细胞的体外成熟

卵泡中的卵母细胞尚未成熟,采集之后要通过体外的培养,使其成熟,才有受精能力。这过程称为卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)。用于卵母细胞的体外成熟的基础养液主要有:BMOC-3、TYH、TCM199、Ham,sF-10、Menezo,B2、NUSC23和MEM等。在上述的基础培养液中加入血清5%～10% 、促性腺激素(0.1-1.OIU/ml HMG,0.1～1.0µg/ml HMG,0.1～1.0/ml LH 等)和生长因子(0.01～10µg/m1 EGF等 )等成分。

培养时间因动物不同而有所差别,一般为22～24h,但猪需培养40～44h, 而兔仅需 12～15h。

培养条件一般温度为37～38℃,气相为5%的C02。