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( 六 ) 体外受精

体外受精的完成需要一个有利于精子和卵子存活的培养系统。目前,用于卵母细胞体受精的培养系统主要包括微滴法和四孔培养板法两类。

1. 微滴法

这是一种应用最广的培养系统。具体做法是在塑料培养皿中用受精液做成20～40µl微滴,上覆石蜡油,然后每滴放入体外成熟的卵母细胞 10～20 枚及获能处理的精子(1.0～1.5)×106个/ml,在培养箱中孵育 6～24h。该法的优点是受精液及精液的用量均较少,体外受精的效果亦较好;缺点是受精的结果易受石蜡油质量的影响,操作亦相对较繁琐,成本也相对较高。

2. 四孔培养板法

该法是采用四孔培养板作为体外受精的器皿,每孔加入500µl受精液和 100～150 制成熟的卵母细胞,然后加人获能处理的精子(1.0-1.5)×106个/时,而后在培养箱中孵育24h。该法的优点是操作相对比较简单,受精结果不受石蜡泊质量的影响;缺点是精子的利用率相对较低,体外受精效果不如微滴法稳定。