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( 七 ) 体外受精的质量评定

卵母细胞的体外受精成功与否通常以精子穿透率、原核形成率、受精分裂率和囊胚发育率来衡量。其中,囊胚发育率最为可靠,因其可反映体外受精的质量。体外受精的具体评定方法以下两种:

1. 固定染色法

卵母细胞体外受精后,用 0.1% 的透明质酸酶去掉其周围的卵丘细胞,然后在醋酸酒精或醋甲醇(1:3)的固定液中固定24～48h,最后用含1%间苯二酚蓝（Lacmoid）均或 1% 的地衣红(Orcein)的 40% 醋酸溶液染色观察。如在受精后 8～lOh 固定染色,可以观察到进入卵母细胞的精子,计算出精子穿透率和多精子受精率。如在受精后18～2Oh 固定染色,可以见到形成的单个、2 个或 2 个以上原核,计算出双原核形成率(正常受精的比率)。

2. 体外培养

受精正常与否,主要体现在其随后的胚胎发育能力。因此,可以通过培养评定其胚胎发育的潜力。

( 八 ) 受精卵的体外培养和胚胎移植

体外受精完成后,如果不需要继续培养观察,则可直接进行胚胎移植。确认的体外受精卵,可进行输卵管移植。所产生的后代即为"试管动物"。

如果需要继续培养观察,可采用微滴法和四孔培养板法两种培养系统。一般培养到囊胚期,再进行胚胎移植。常用的实验动物体外受精卵基础培养基主要有BMOC-3、TYH、TCM199、Ham's F-10、NUSC23和 MEM 等。