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( 三 ) 注核

去核卵母细胞经恢复就可作为核移植的受体接受核供体移入。按核供体移入部位的不同分两类,即带下移植(注射)和细胞质内注射。若采用带下注射,可采用斜口玻璃针(大小时核细胞大小而定)吸取已分离好的单个供体细胞,并沿去核时留在透明带上的切口插进去,然后反吸一点细胞质,将细胞连同胞质一起注射到卵周隙内,这样可使供体细胞与胞质紧密的粘在一起,便于随后的融合。但在吸取供体细胞时,要保证细胞膜的完整,才能使供体细胞膜与卵母细胞质膜粘合在一起,有利于融合。

( 四 ) 供体细胞与受体卵母细胞的融合 

带下注核的卵母细胞必需对其进行融合处理,才能使供核细胞与受体卵母细胞形成卵核复合体。目前,细胞融合的方法主要有 3 种,即化学、仙苔病毒和电融合法。电融合法是目前动物核移植的最佳融合方法,因其不仅可使供体细胞与受体卵母细胞的质膜有效融合,还可以引起卵母细胞的激活。电融合原理是依靠直流脉冲使细胞膜产生可逆性的微孔,进而导致它们 间的融合。然而,该方法的影响因素较多。首先,待融细胞间的接触面与脉冲电场磁力线方向要相互垂直。其次,脉冲强度、时间和融合液种类要相互配套,在一定渗透压和离子强度的合液中,电脉冲强度与时间不足,膜不能有效穿孔或穿孔面积数量不够,不能诱导有效的融;相反,电脉冲强度过大或时间过长,会导致膜的不可逆性击穿使细胞崩解。不同的动物种,不同的融合仪器,甚至不同的实验室条件,融合参数都有差异。