斑马鱼克隆方法的改良
据研究人员介绍,斑马鱼是继老鼠之后另一种普遍用于遗传学研究的脊椎动物。由于它们和人类有许多相同的基因,所以可以用于癌症和心血管的研究。此外,在过去的20多年里,斑马鱼也是一种重要的模式生物,用于理解机体的正常发展和出生缺陷等。近些年,研究人员已经将其用于模拟人类的疾病发生,分析器官细胞群的形成以及功能。
先前的斑马鱼克隆方法成功率很低,研究人员解释说,但是使用这种新方法可以提升2%-13%的克隆成功率。
常用的克隆技术是使用一个未成熟的卵和一个供体细胞。卵细胞的DNA被移除并用供体细胞的DNA取代,然后卵细胞会被诱导进行分裂,最终产生供体细胞的精确遗传拷贝。
使用这项新技术,可以温和地将卵从雌性斑马鱼中取出,然后将其放置到大鳞大麻哈鱼的卵巢液体中。这样做是为了在一段时间内使卵处于不活跃状态,研究人员可以有两三个小时的时间对卵进行处理。然后用激光术将卵中的DNA移除。接下来就可以使用一种新颖的更有效的移植方法,将供体细胞移植到卵中。
斑马鱼的卵是易于观察的,而且它们的发育也较容易追踪,所以斑马鱼克隆技术的改良对于遗传学研究来说是重要的。当下只有老鼠是基因靶向最好的模型,所以这项技术可能为遗传学研究提供新的模型。
推荐原始出处:
Nature Methods Published online: 30 August 2009 | doi:10.1038/nmeth.1369
Somatic cell nuclear transfer in zebrafish
Kannika Siripattarapravat1, Boonya Pinmee2, Patrick J Venta3,4, Chia-Cheng Chang5 & Jose B Cibelli2,6,7
1 Comparative Medicine and Integrative Biology, College of Veterinary Medicine, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
2 Department of Animal Science, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
3 Department of Microbiology and Molecular Genetics, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
4 Department of Small Animal Clinical Sciences, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
5 Department of Pediatrics/Human Development, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
6 Department of Physiology, Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.
7 Programa Andaluz de Terapia Celular y Medicina Regenerativa, Andalucía, Spain.
Top of pageWe developed a method for somatic cell nuclear transfer in zebrafish using laser-ablated metaphase II eggs as recipients, the micropyle for transfer of the nucleus and an egg activation protocol after nuclear reconstruction. We produced clones from cells of both embryonic and adult origins, although the latter did not give rise to live adult clones.
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