移植性肿瘤动物模型
(一)非实体瘤细胞移植模型
临床白血病患者的血液标本、骨髓标本或小鼠腹腔内培养传代的非实体瘤腹水标本添加等量平衡盐溶液(如PBS)或生理盐水,充分混匀后进行离心分离肿瘤细胞。如果是体外悬浮培养传代的非实体瘤细胞,则直接收获带肿瘤细胞的培养液进行离心获得肿瘤细胞。离心的速度和时间是:800~1500r/min,5分钟。从临床白血病患者的血液标本和骨髓标本收获的肿瘤细胞经常含有红细胞,还需要用红细胞溶解剂(如0.83%NH4Cl)破碎红细胞,然后用平衡盐溶液洗涤离心细胞,弃除红细胞溶解剂和碎片。以上各种来源的肿瘤细胞收获后用无血清培养液或平衡盐溶液调成(1×1000000~1×10000000)/ ml浓度,接种小鼠或裸小鼠或SCID小鼠腹腔或尾静脉,每只小鼠0.2~0.5ml。接种的量根据细胞的恶性程度不同有所加减。临床标本来源的及恶性程度偏低的肿瘤细胞一般接种量宜大不宜小。接种7~10天可以见小鼠腹部增大或检测到血液中的肿瘤细胞。
另外,当小鼠腹腔接种成功后,可抽取小鼠腹水分离肿瘤细胞,进一步作皮下接种制作实体瘤移植模型(参考后面实体瘤细胞移植模型的制作)。
(二)实体瘤细胞移植模型
临床肿瘤组织或已在动物体内移植传代成功的肿瘤组织用平衡盐溶液充分洗涤弃除血迹,并将周围非肿瘤组织剪除干净;然后将之剪碎(剪得越小越好);用平衡盐溶液充分悬浮并移置离心管内,室温下静置5分钟;弃除上层含细胞碎片的洗液,留下细小肿瘤组织沉淀;最后进行浸泡消化:用肿瘤组织体积5~10倍的消化液重新悬浮肿瘤组织沉淀物并吹打均匀;放置在37℃中30分钟,期间每隔5分钟摇动一次;用等体积含血清的培养液终止消化;室温下静置5分钟;收集上层含细胞的悬液置另一离心管;下层未完全消化的肿瘤组织小块可以进行第二次的浸泡消化。多次收集到的肿瘤细胞悬液汇总后进行离心,800~1000r/min,5分钟;弃除上层液体,留下细胞沉淀;用完全培养液悬浮细胞、吹打均匀和进行细胞计数,调细胞浓度为1×10000000/ml以上;最后进行动物皮下或原位接种,接种的细胞数为1000000~10000000个细胞,体积为皮下接种0.2~0.3ml,原位接种20~500μl。浸泡消化所用的消化液与不同组织的肿瘤有所不同:来源于一般器官的肿瘤组织用胰蛋白酶(PBS配制),来源于神经组织或间质组织的肿瘤组织用胶原酶(用无血清培养基配制)。一般接种后需要10天左右才能检测到肿瘤细胞的生长。
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