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普通PCR

2015年09月08日来源：生物帮作者：生物帮责任编辑：wlladmin

摘要：普通PCR

(1) 在冰浴中，按以下次序将各成分加入无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer 5 μl

dNTP mix (2mM) 4 μl

引物1(10pM) 2 μl

引物2(10pM) 2 μl

Taq酶 (2U/μl) 1 μl

DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

加ddH2O至 50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

(2) 调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。

(3) 结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

(4) PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油;否则，直接取5-10μl电泳检测。

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