RSS订阅

实验方法

细菌人工染色体载体系统

2015年09月09日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型》 作者:刘恩岐 李亮平 师长宏 责任编辑:wlladmin
摘要:细菌人工染色体载体系统

细菌人工染色体载体(bacterial artificial  chromosomes,BAC)是在20世纪90年代发展起来的一种大片段DNA克隆载体,它是以大肠埃希菌的“致育因子”(F factor)为基础的人工合成载体。致育因子亦称F质粒,它可将宿主染色体基因转移至另一宿主细胞,它本身转移到F宿主细胞后。可使后者成为F+细胞。BAC的克隆能力介于质粒和YAC之间,可克隆平均200kb的大片段DNA。 BAC文库开辟了克隆大片段基因组DNA的新的途径,人类和小鼠都已克隆入BAC文库,为基因敲除和BAC转基因提供了便利。

1.BAC的结构  人工构建的BAC载体,如 pBeloBAC11,大小只有7.4kb,保留了F因子复制的起始基因OriS和定向基因repE(易于DNA复制的解旋酶),控制质粒拷贝数的parA、parB和parC基因以及供载体筛选氯霉素的抗性基因。基因组DNA序列经过限制性内切酶的部分消化,经过 DNA连接酶的连接,克隆于BAC载体的HindⅢ和 BamHⅠ位置,构建成BAC文库。

2.BAC的优点  BAC文库的克隆效率较高,构建相对简单,嵌合率低,稳定性高。BAC的parA、parB和parC基因使F因子保持1~2个分子/细菌细胞的低拷贝数,并确保细胞在分裂时F因子 DNA能精确地分配到子代细胞中。F因子能扩增非常大的DNA片段,自然发生的F因子能携带1/4的大肠埃希菌染色体。拷贝数低,限制了细胞内质粒组分之间的重组,从而降低了BAC的重排。用重组工程技术(recombineering)可对BAC序列进行精确的修饰,如引入LoxP/Frt位点、正负筛选基因、插入/缺失突变等以构建基因打靶载体。

点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息
Baidu
map