亚急性衰老动物模型建立方法

2013年06月03日 浏览量: 评论(0) 来源:丁香园 作者:佚名 责任编辑:lmjinfo
摘要:亚急性衰老动物模型建立方法

    基本原理:在一定时间内连续给动物注射D-半乳糖,使机体细胞内半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶催化下,还原为半乳糖醇,这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内,影响正常渗透压,导致细胞肿胀,功能障碍、代谢紊乱,破坏并消耗机体抗氧化防御系统,使自由基积聚。同时在半乳糖还原成半乳糖醇的过程中又产生(O2-),这样使细胞膜脂质受损,过氧化脂质、脂褐质等增高,出现衰老。

       操作步骤:

       取健康雌性小鼠,普通饲料常规喂养。模型组小鼠每天颈背部皮下注射D-半乳糖(0.25ml/10g),连续6~8周后,小鼠行动迟缓,毛色灰暗,形体瘦弱,呈现明显的衰老体征,即造成亚急性衰老模型。空白对照组同样每天皮下注射生理盐水(0.25ml/10g)。末次给药和D-半乳糖2h后,进行学习记忆训练实验(避暗实验),次日测定记忆成绩,然后眼眶取血后处死。取小鼠胸腺、脾、脑、肝和心脏组织,测定各项衰老指标。

       避暗实验(step through test):反射箱分单独5个箱,每个箱大小为36cm×12cm×12cm ,分明暗两室。明室由透明有机玻璃构成,暗室底部安铜栅,通以36V电流,明暗两室之间有一直径为3cm洞口,反射箱通过连线与微机连接,由微机控制记录动物从明室通过洞口进入暗室的潜伏期。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室,同时开始计时,动物穿过洞口进入暗室受到电击,计时自动停止。取出小鼠,记录小鼠从明室入暗室的潜伏期和5min内的电击次数,此为训练成绩。24h后再测为测试成绩。

       测定指标:

       1、体重

       2、脏器指数(胸腺、脾、肝和脑的脏器指数)

       脏器指数=脏器重量/体重×100%

       3、抗氧化指标

       血液:MDA、SOD和MAO

       肝和脑:MDA

       脑:MAO

       注意事项:

       1、选择雌性小鼠,因实验周期长,雄性鼠长期群居,好咬斗易造成受伤影响实验结果。

       2、注射给药必须无菌操作,鼠笼垫料与饮水壶定时换洗,保持清洁,因给药时间较长,机体逐渐老化,功能状态渐差。

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