实验方法
大鼠心肌梗死模型制作图解
(一)制作前准备
1、器械:动物呼吸机。开胸制作心梗模型,维持呼吸至关重要。虽然据说某些牛人可以不用呼吸机,但是我想这是经验积累的结果,开始时必然要用;况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。当然,如果你经费异常充足,不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。显微器械,最主要的是针持,大鼠胸腔、心脏均很小,常规器械无法进入胸腔缝扎。其他手术器械以眼科器械为主。
2、动物:应选择成年健康大鼠,耐受性较好。最重要的是要充分利用每一只动物,包括死亡的大鼠。许多人都知道制作大鼠模型需要多练习,但是练习不是买一大批大鼠,不停地缝扎,然后不停地扔掉死的大鼠;当然,制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉,如果可能的话,最好先找一份大鼠的解剖图谱,熟悉手术区域的解剖结构;同时研究实验流程,熟悉每一个实验步骤。大鼠死亡后,不要急着扔掉,利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤,直到熟练为止。
3、实验者:实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态,制作模型需要时间,尤其是早期,需要耐心、仔细的摸索;必须对每一个步骤进行认真地研究。最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间,加上准备及扫尾的时间,制作十只模型就需要一天的时间,如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右,这样一天下来腰酸背痛是必然的,你能坚持多久?不熟练的话,一只就要两、三个小时;同时还要看着大鼠在你的手中死亡,这是很揪心的事情。因此,实验者必须具备良好的心态,急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。
本文系气管切开插管,缝扎LAD制作模型。亦有经口插管,液氮冷冻制作模型。
(二)制作步骤
1、电子秤称量大鼠体重
2、提起大鼠尾巴,置入小笼中。
3、倒出适量乙醚于纱布上,置入鼠笼内,盖紧笼盖。
4、待大鼠麻醉后取出,补充氯胺酮75~100mg/kg(ip)持续麻醉;阿托品20~30μg/kg腹腔注射,减少气道分泌物。
5、固定大鼠仰卧于手术台上。剪除颈部及胸部被毛。
6、纵形剪开颈部皮肤约1.5~2cm,分离皮下组织及肌肉。
7、显露气管及其上甲状腺腺体。
8、于腺体后方钝性分离气管并带线,注意勿损伤腺体及血管。 |
9、提起丝线,剪刀于气管环之间剪开气管半周。
10、行气管插管,接呼吸机。调整呼吸频率、吸呼比及潮气量(根据呼吸机使用指南及大鼠表现调节)。
11、胸骨左缘3mm纵形剪开胸部皮肤约4cm。
12、钝性分离皮下、胸大肌与前锯肌。
13、缝合、牵开胸大肌及前锯肌,显露肋骨及肋间肌。
14、第三肋间逐步剪开肋间肌,显露胸膜。
15、大镊子于呼气时刺破胸膜,进入胸腔。撑开肋骨,撕破心包,显露心脏。必要时可于左外侧垫纱布隔开左肺。
16、探查确定左心耳,确定缝扎位置(肺动脉圆锥与左心耳交界处下方2mm)。
17、5-0(13mm针)prolene线缝扎LAD(肉眼不可见),出针。
18、打结(外科结)。
19、探查无出血后关胸,注意勿缝到心肺及血管,胸腔留置吸引管一根。
20、缝合肋间后予碘附消毒术野肌肉及皮肤。对合胸大肌与前锯肌。
21、缝合皮肤。
22、针筒抽吸胸腔积气积液,拔除吸引管。
23、大鼠苏醒后,拔除气管插管,清除气道血块及分泌物。
24、Prolene线一针缝合气管切口。
25、碘附消毒术野,对合肌肉及皮下。
26、缝合颈部切口。
27、松开大鼠,放回鼠笼。