实验方法
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验
2013年07月15日
来源:丁香园
作者:佚名
责任编辑:lmjinfo
摘要:体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性,最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性,最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
实验方法原理:抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
实验材料:小鼠
实验步骤:
一、培养条件
用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。
二、实验步骤
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml,接着进行DOX低浓度的筛选。
3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应曲线,求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。
注意事项:
1. 要具备培养细胞的实验室条件,谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值,以确定其实诱导浓度。
3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株,对阿霉素等产生抗性的细胞株,往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。
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