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    胚胎移植技术是克隆、转基因、体外受精和性别鉴定等各项胚胎生物技术研究和发展必要的技术手段和环节,也是目前比较流行的动物繁殖技术之一。

 

    提供胚胎的个体称为供体，而接受胚胎的个体称为受体。

    (1)供体母牛的选择：供体牛选择的原则 当制定应用胚胎移植计划时，一定要慎重地选择好适合的供体牛，要求 健康无疾病、具有较高的育种价值和生殖机能处于较高的水平。技术和经济两方面考虑，可参考以下原则：①品种优良。符合本品种标准，血统、体型外貌和生产性能全优，具有早熟性和长寿性，且遗传性稳定、谱系清楚，无遗传缺陷。②体质健康。体质健壮、肢蹄强健、繁殖机能正常，无遗传病、传染病、难产、流产和繁殖障碍的经历，或很低的助产率。发情周期不明显的繁殖障碍牛、患子宫内膜炎或长期空怀母牛，都不能作为供体。③年龄适宜。在15月龄到8周岁以内为宜。④繁殖品质。具有较高的繁殖力，生殖器官正常，发情周期正常。从幼龄起发情周期就正常（或至少以前有过两次正常发情的）母牛，经产后60 天以上有两次正常发情记录；受胎性好，受胎率及配种指数较好，连续一年产一犊。⑤排卵成绩。母牛生殖器发育良好，尤其是卵巢、子宫的状态，对超数排卵要有良好的反应，且排卵数多，采得的受精卵质量良好。⑥性情温顺。选择性情温顺的母牛作为供体，以便于操作。预作为供体的母牛，最好有一次完整的生产记录（产犊、产奶），以衡量其种用价值后，才有可能作为供体选择的对象。

 

   (2)受体母牛的选择：受体牛仅作为借腹怀胎，不要求遗传性状，但发情周期必须正常，生殖器官无疾病，体形大且健康，可用廉价低产的青年奶牛或黄牛作受体。

 

    供体、受体母牛的发情同期化处理
    由于在发情周期内，母牛的生理变化很大，供体和受体的生理状况要趋于一致，否则移植后的胚胎不能存活。因此，要求供体、受体母牛在发情时间上要相同或相近，前后不宜超过1天。所以要对供体和受体进行同期发情处理。

 

    体外受精胚胎生产
    在胚胎移植中，通常采用超数排卵法获得优良胚胎，但是该方法效率低下，成本较高。八十年代以来，发达国家对体外受精胚胎生产技术进行了广泛的研究，取得了突破性进展。目前，牛胚胎的实验室生产技术在许多发达国家已成为常规技术。实验室胚胎生产技术的完善不仅在实际生产中具有重大经济意义，可以生产大量廉价胚胎，而且成为理论研究的重要技术手段。一些高新技术，如克隆动物的生产、转基因动物的生产等等都必须以实验室胚胎培养技术为基础。

 

    目前，牛胚胎的实验室培养技术主要有两种方法。一种是共培养系统。该系统首先必须在培养皿上贴壁培养输卵管上皮细胞、颗粒细胞等，然后将受精卵和贴壁培养的上皮细胞一起培养，直至生产出可用胚胎。共培养系统是一种操作复杂、费时、费力的胚胎培养方法。另一种是人工合成输卵管液（SOF0培养系统，相对而言，该方法操作比较简单，而且经过近年来的研究和完善，SOF培养系统的培养效果已达到甚至超过共培养系统。

 

    利用超声波引导法在牛体上采集卵母体外受精生产胚胎，近年来得到发展并逐渐成熟。此项技术已开始在生产中应用，对患繁殖障碍或因老龄无超排反应的高产母牛来说，利用活体采卵技术，无疑可以生产优质胚胎。

 

    实验室胚胎生产技术是一项复杂的系统工程。全部过程包括，卵母细胞的采集方法、卵母细胞的成熟培养方法，精子的获能处理方法、精卵的受精培养方法和胚胎的发育培养方法。要想获得理想的实验室胚胎生产效果，必须提高每一步的效率，使整个过程达到最完善的组合。

 

    胚胎的收集
    胚胎收集指的是利用冲卵液将早期胚胎从供体母牛的子宫角内冲出来，并收集于一定的器皿中。胚胎收集方法有手术法和非手术法两种，现普遍采用非手术法。一般在供体母牛发情配种后6～7天内收集胚胎，胚胎处于致密桑椹期和囊胚期。此方法简便易行，对生殖道的损伤的危险性小，收集效果比较好。

 

    首先将供体牛保定，体位前高后低，便于操作和胚胎冲出。尾根处(第3-4尾椎)剪毛，酒精消毒，注射2％普鲁卡因2～3毫升或2％～4％盐酸利多卡因2～4毫升等进行尾椎硬膜外麻醉。如牛不安宁可肌注2％静松灵2-4毫升。直肠检查卵巢大小、子宫状况，估计黄体数量。清洗外阴部，用消毒液消毒。

 

    非手术冲取胚胎所用的冲卵管有二路式和三路式，其不同之处是冲卵液注入和导出的管道，二路式是同一管道，而三路式则各有进出两个管道。另外两种冲卵管都有一注入空气的管道，使之冲卵时，可将子宫角内腔基部固定。但气囊充气应适度，过于膨胀易损伤子宫内膜，过小则不能固定冲卵管，使子宫留有间隙，冲卵液由阴道流出。

 

    一般每侧子宫角需冲卵液500毫升，冲卵液温度保持在37~C，冲卵液的导出应顺畅，进出液量要相当，因此，操作时，可用手隔着直肠壁将子宫提高，促进液体回流。收集到的冲卵液，置于37~C无菌间待检。收集胚胎的冲卵液目前多采用改良的杜氏磷酸缓冲液(mPBS)，此液可用于冲洗胚胎，也可用于胚胎的保存液和培养液。配制方法简单，成本低，比较适用。

 

   胚胎的检查和级别划分
    将收集到的冲卵液静止10～30分钟，待胚胎下沉后，将上层液吸出，剩余的沉淀液体(约50毫升)分别倒入几个检卵杯中，置于体视显微镜下将胚胎检出。检查时要求仔细快捷，不要丢失胚胎，在30分钟以内检查完毕，以防显微镜光源温度高，而使载物台温度上升，从而影响了胚胎质量。

 

    将收集到的胚胎，置于高倍镜下观察其形态和发育时期。正常发育的胚胎，卵裂球整齐清晰，大小较一致，分布均匀而紧密，透明带完整，发育速度与胚胎日龄相一致。而没有受精、透明带内卵裂球异常、透明带破损等为不可用胚胎。　

    胚胎的移植  
    牛的胚胎移植方法有手术和非手术移植两种，目前多采用非手术移植法。使用特制的胚胎移植器，通过阴道和子宫颈，将胚胎注入到子宫角的一定部位。其操作过程如下：

 

    (1)受体牛的保定和消毒：与供体牛处理方法相同。

    (2)胚胎的洗涤和封装：将鉴定的优良胚胎用新鲜的保存液洗涤2～3次，以除去附着的黏液、杂质等，然后将胚胎封装于0．25毫升的塑料细管中。封装时，先在细管内吸入保存液大约5厘米长度，然后使管内形成0．5厘米的空气层，再吸入含有保存液的胚胎大约2．5厘米长度，再形成0．5厘米的空气层，最后吸入保存液直至管端。胚胎装入后，必须将细管放在显微镜下检查，以确定胚胎是否在管中。

    (3)移植胚胎：将封装好胚胎的细管，开口一端(远离棉芯的一端)向内装入移植器中。直肠检查受体牛卵巢排卵一侧的黄体质地，通过直肠把握子宫颈，将移植器送入子宫颈，再直肠把握子宫角，把移植器轻轻推入有黄体一侧的子宫角，并使其深入到子宫角的大弯部，随后将胚胎推入并缓慢取出移植器。操作时注意动作要稳、快、移植部位要准确，移植后检查细管，看有无胚胎遗漏。如有遗漏，则需重新移植。

 

    胚胎移植后要注意观察供体和受体的健康状况和在预定的时间内是否发情。对于供体牛，在下一次发情即可配种，如仍要做供体则一般要经过2-3个月才可超排卵。对于受体牛，如移植后发情，则表明移植失败，可能胚胎丢失、死亡、吸收或有缺陷，也可能是受体牛的子宫环境不相适宜；如未发情，也要继续观察3～5个情期，并在适宜时期进行妊娠诊断。