实验方法
急性胰腺炎实验动物模型制备
胰腺炎动物模型是研究胰腺炎发病机制及探讨临床治疗的最好的方法,但是由于不同类型的胰腺炎间其发病机制不同,对胰腺炎的发病机制还不清楚,所以没有一种很好的动物模型可以模拟人的胰腺炎。但自1856年Busnar-do等以胆汁和橄榄油混合液注射犬胰管,成功地诱导急性胰腺炎模型以来,经过一个多世纪的探讨,胰腺炎动物模型的制备方法主要有以下几种:
1.牛磺胆酸钠造模
1）模型建立方法:大鼠于术前12h禁食,自由饮水,戊巴比妥溶液2mg/100g体质量行腹腔内麻醉,固定。经上腹正中切口入腹,提起十二指肠以小号血管夹分别夹住十二指肠段和肝门部胰胆管。ＴＢ针(4.5针头,1ml注射器)穿刺胰胆管(最好用微泵注射),注射5%C牛磺胆酸钠(0.1ml/100g),持续1min,停留5min,然后拔除针头,去除血管夹。可观察大鼠胰腺组织明显水肿、出血,缝合腹壁各层。
2）模型的特点和功用：此法是急性坏死性胰腺炎(ANP)较成熟的模型。
3）模型建立和使用注意事项：24h的存活率为50%左右
2.蛙皮素造模
1）模型建立方法:大鼠于术前12h禁食,自由饮水,蛙皮素(25μg/kg)腹腔注射,注射后5h形成水肿性急性胰腺炎(CIP)
2）模型的特点和功用：此法是水肿性急性胰腺炎模型,程度较轻.
3）模型建立和使用注意事项：现在国内以研究ANP为主,使用此模型请注意研究内容.
3.逆行胆管注射法
结扎胰胆管,行主胰管套管插管,经主胰管注入可激活胰酶的物质或胰酶,如脱氧胆酸钠、自体胆汁等。胰酶注入胰管产生急性胰腺炎,如与PGE2同时灌注则产生急性坏死性胰腺炎。Schmidt等用低量胰管灌注糖脱氧胆酸结合静脉注射蛙皮素制成大鼠急性胰腺炎模型,可产生腺胞中度坏死的均匀损伤,适用于对胰腺炎的研究.
4.胰管胆结扎法
结扎进入十二指肠处胰胆管或单纯结扎胰管,Lerch等在壶腹部结扎胰胆管,结扎后6h出现水肿性胰腺炎,12h后出现出血、坏死、炎性细胞浸润。该模型的优点是简单且避免了药物引起非特异性系统影响,与人体胆汁返流性胰腺炎相类似,但有时只产生轻度胰腺炎。Runzi等对此方法进行了改进,把十二指肠的近端10cm离断后两端闭合结扎胆总管,胃与十二指肠吻合,使胰液流入闭袢,随其内压增加而发生逆流,形成急性坏死性胰腺炎,术后4h发生水肿性胰腺炎,9~12h有出血坏死。另外,还有用胰管结扎加胰动脉或静脉阻断产生急性胰腺炎.
5.饲养法
胆碱乙硫氨酸饲养雌性大鼠制成急性胰腺炎模型,而雄性大鼠对药物刺激不敏感。用无胆碱乙硫氨酸饲养幼鼠,4d后均发生了胰腺坏死及腹腔脂肪坏死。原理可能是无胆碱乙硫氨酸致胰腺腺泡分泌作用受阻,酶原颗粒和溶酶体在细胞内激活.
6.促分泌法
用蛙皮素类似物CCK-PZ静脉或皮下注射,使胰腺蛋白水解酶分泌大量增加达到能引起胰腺腺泡自溶的水平.
7.离体胰腺炎模型
主要采用孤立体外灌注技术,游离胰腺及十二指肠,行脾动脉、肠系膜动脉、门静脉和胰管插管;然后取下胰腺,连接能控制温湿度的氧和灌注循环器;稳定灌注30min后,从动脉灌注游离脂肪酸模拟酒精性胰腺炎;阻塞胰管并静脉注射蛙皮素产生胆源性胰腺炎;使缺血2 h产生缺血性胰腺炎.
