实验方法
急性早幼粒白血病HL - 60 细胞动物模型的建立与鉴定
重度联合免疫缺陷(SCID) 小鼠是美国Bosma证实的属CB - 17 近交系小鼠第16 号常染色体发生隐性突变基因(SCID) 的突变型小鼠1 。纯合的SCID 鼠基因导致小鼠几乎完全丧失T 和B 淋巴细胞的功能, 人们便将这类小鼠广泛用于免疫学、肿瘤学的研究。急性早幼粒细胞白血病(APL) 在诱导分化剂全反式维甲酸作用下可向正
常粒系分化,临床上用全反式维甲酸(ATRA) 治疗APL 虽能引起完全缓解,但APL 的发病机制仍不太清楚,因此,建立一个稳定的动物模型用来研究APL 诱导分化的机制有重要的意义。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 人白血病细胞系 人急性早幼粒白血病HL - 60 细胞株从中南大学肿瘤研究所引进,用含10 %小牛血清(杭州四季青) 的RPMI - 1640 培养基(Gibco 公司产品) ,5 %CO2 ,37 ℃培养。
1. 1. 2 SCID 小鼠 16 只,雄性,3～4 周龄(购于上海中国科学院实验动物中心) ,小鼠在层流架内带盖鼠盒中饲养(符合SPF 标准) 。室内空气经中效过滤, 饮用水为加少量食盐的灭菌双蒸水, 标准颗粒饲料加维生素C、鸡蛋, 垫料及一切与鼠接触物品均灭菌处理。分为两组,每组8 只,每只分别腹腔或静脉直接接种5 ×106 个细胞。
1. 2 方法
1. 2. 1 移植 SCID 小鼠移植前未作任何处理,取对数生长期HL - 60 细胞用于移植, 每只鼠以尾静脉注射或腹腔接种5 ×106 个细胞。
1. 2. 2 外周血白细胞计数及分类 接种前和接种1、2、3、4 周或病程后期, 分别取尾静脉血检测。
1. 2. 3 形态学观察 取外周血,吉姆萨染色,油镜下观察细胞形态,每片计数200 个细胞,按早幼粒、中幼粒、晚幼粒、杆状核及分叶核细胞分类计数,计算早幼粒细胞的比例。
1. 2. 4 病理学检查 濒死动物进行病理检查,取肝、脾、肾、骨、心脏、肺、肌肉、睾丸及肿瘤实体,以10 %甲醛固定48 小时以上,常规石蜡切片,镜检。
1. 2. 5 染色体核型分析 用标准的染色体染色技术将体外培养的HL - 60 细胞和来自SCID 小鼠腹瘤组织细胞和血液细胞,按常规方法做成染色体标本, 即将体外培养的HL - 60 细胞和来自SCID 小鼠腹瘤组织细胞和血液细胞加含10 %小牛血清的RPMI - 1640 培养基在37 ℃、5 % CO2 饱和湿度的CO2 孵箱中培养45～66 h ,加终浓度为0. 4 的秋水仙素阻滞细胞于分裂中期,然后收集细胞、低渗、固定、滴片、G显带、镜检。
