黑色素瘤是皮肤癌中最具侵袭性的恶性肿瘤⋯。近年来， 世界范围黑色素瘤 的发病率 以每年 3． 1％ 的速度急剧上升。我国黑色素瘤病例增长加快，每年新发病例约 2 万例。目前，原位黑色素瘤术后5 年生存率超过 95％， 但是一旦发生转移， 则很难治愈， 而且预后极差， 5 年生存率不到 l0％。B 16 小鼠黑色素瘤细胞株是生长在C 57B L／ 6Jdx鼠的自发性肿瘤， C 57B L／6J 小鼠是研究 B 16 移植瘤和转移瘤最常用实验模型之一。肿瘤模型对研究肿瘤的病因、发病机制、抗癌药物筛选及肿瘤防治等具有非常重要 的意义 。目前有研究报道了D icerl 与黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的相关性， 本研究以D i cerl转基因小鼠为实验材料， 建立新的黑色素瘤模型， 为进一步探 讨黑色素瘤的发病 机制提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 材料

实验动物： 5~6 周龄 SPF 级雌性 C57B L／ 6J 小鼠，来自中国医科大学实验动物部[SC X K (辽)2013一 OOO1]，8～ 10 周龄 SPF 级雌性 D icerl 转基因小 鼠， 来 自中国医科大学实验动物部 。试剂： D M E M 、青霉素 、链霉素、PB S 均购 自G ibco 公司。细胞株： 小 鼠黑色素瘤细胞 B 16F0(实验室保存)， 小鼠黑色素瘤细胞B 16F 10(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)。

1．2 细胞培养

 小鼠黑色素瘤细胞系 B 16F0、B 16F 10 分别使用含体积分数 10 ％胎牛血清的 D M E M 培养基 ，加

入100 IU ／m L 青霉素、100 IU ／m L 链霉素，37 。C 、体积分数 5％ C O 恒温孵箱中培养 。使用质量分数0． 25％ 的胰蛋白酶消化并中止后传代 ，取对数生长期 的细胞 进行实验。

1．3 动物实验

 D icerl转基因小 鼠和C 57B L／ 6Jd"鼠饲养于SPF环境， 24 ℃恒温， 光控(12 h 明112 h 暗)，自由摄入水食[SY X K (辽)20 13— 0007】 。D icerl 转基因小 鼠随机分成 2 组 ，每组 4 只： D icerl 组 1(皮下注射 B 16F 0细胞)、D icerl 组 2(皮下注射 B 16F 10 细胞)； C 57B L／6J 小 鼠随机分成 2 组，每组 4 只： C 57B L／ 6J 组 1(皮下注射 B 16F 0 细胞)、C 57 B L ／ 6J 组 2 (皮下注射B 16F 10 细胞 )。

1．4 成瘤情况观察

 肿瘤 细胞 腋下 皮 下注射 后 ，每 日观 察注射部位 ， 出现可触及 的肿块 时记为肿瘤 出现 时问 ，每 日测 量 肿 瘤 最长 径 (L )和垂 直 方 向最大 横 径(W )，计算肿瘤 体积：V = L W 2／ 2 ；肿瘤 生长 速度以肿 瘤每天 增长 的体积 计算 。待小 鼠状态 变 差 ，处死 小 鼠，取材 。