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学术文章

应用Dicerl转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究

2015年12月21日来源：实验动物与比较医学作者：李兆阳姜川郭晓冲杨葳董婉维郑志红责任编辑：admin

摘要：目的应用D icerl(编码蛋白属于RN A 酶Ⅲ 家族)转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于D i cerl转基因鼠和C57BL／ 6J 小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C 57BL／6J小鼠组肿瘤比较，Dicerl转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体积大(尸 l <0．05)。结论应用Dicerl 转基因小鼠建立了黑色素瘤模型，结果显示Dicerl基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。

黑色素瘤是皮肤癌中最具侵袭性的恶性肿瘤⋯。近年来，世界范围黑色素瘤的发病率以每年 3． 1％的速度急剧上升。我国黑色素瘤病例增长加快，每年新发病例约 2 万例。目前，原位黑色素瘤术后5 年生存率超过 95％，但是一旦发生转移，则很难治愈，而且预后极差， 5 年生存率不到 l0％。B 16 小鼠黑色素瘤细胞株是生长在C 57B L／ 6Jdx鼠的自发性肿瘤， C 57B L／6J 小鼠是研究 B 16 移植瘤和转移瘤最常用实验模型之一。肿瘤模型对研究肿瘤的病因、发病机制、抗癌药物筛选及肿瘤防治等具有非常重要的意义。目前有研究报道了D icerl 与黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的相关性，本研究以D i cerl转基因小鼠为实验材料，建立新的黑色素瘤模型，为进一步探讨黑色素瘤的发病机制提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 材料

实验动物： 5~6 周龄 SPF 级雌性 C57B L／ 6J 小鼠，来自中国医科大学实验动物部[SC X K (辽)2013一 OOO1]，8～ 10 周龄 SPF 级雌性 D icerl 转基因小鼠，来自中国医科大学实验动物部。试剂： D M E M 、青霉素、链霉素、PB S 均购自G ibco 公司。细胞株：小鼠黑色素瘤细胞 B 16F0(实验室保存)，小鼠黑色素瘤细胞B 16F 10(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)。

1．2 细胞培养

小鼠黑色素瘤细胞系 B 16F0、B 16F 10 分别使用含体积分数 10 ％胎牛血清的 D M E M 培养基，加

入100 IU ／m L 青霉素、100 IU ／m L 链霉素，37 。C 、体积分数 5％ C O 恒温孵箱中培养。使用质量分数0． 25％的胰蛋白酶消化并中止后传代，取对数生长期的细胞进行实验。

1．3 动物实验

D icerl转基因小鼠和C 57B L／ 6Jd"鼠饲养于SPF环境， 24 ℃恒温，光控(12 h 明112 h 暗)，自由摄入水食[SY X K (辽)20 13— 0007】。D icerl 转基因小鼠随机分成 2 组，每组 4 只： D icerl 组 1(皮下注射 B 16F 0细胞)、D icerl 组 2(皮下注射 B 16F 10 细胞)； C 57B L／6J 小鼠随机分成 2 组，每组 4 只： C 57B L／ 6J 组 1(皮下注射 B 16F 0 细胞)、C 57 B L ／ 6J 组 2 (皮下注射B 16F 10 细胞 )。

1．4 成瘤情况观察

肿瘤细胞腋下皮下注射后，每日观察注射部位，出现可触及的肿块时记为肿瘤出现时问，每日测量肿瘤最长径 (L )和垂直方向最大横径(W )，计算肿瘤体积：V = L W 2／ 2 ；肿瘤生长速度以肿瘤每天增长的体积计算。待小鼠状态变差，处死小鼠，取材。